《南昌大学学报(医学版)》2023年第6期全文

发布时间:2024-1-12 | 杂志分类:其他
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《南昌大学学报(医学版)》2023年第6期全文

期刊基本参数:CN36G1323/R∗1956∗b∗A4∗106∗zh∗P∗¥20.00∗1500∗20∗2023G12南 昌 大 学 学 报 (医 学 版)双月刊 2023年12月 第63卷 第6期目 次(卷终)【基础医学】COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮G间质转化?????????????????????????????????????? 陈松芝 汪 杨 元文峰 曾佳伟 邹 敏 阮起超 丁 浩(1)肾缺血再灌注致肺损伤关键基因 Alox5ap的筛选及其表达与功能验证 ???????????????????????????????????? 欧阳秀芳 赵 宁 付尚淼 孙智坚 钱克俭 陶文强(8)前列腺素 F2α在小鼠月经发生过程中的作用机制????????? 田聪贵 徐 妹 潘海波 王小敏(15)RBM43调控SlugmRNA 抑制肝癌细胞转移的机制研究 ????????? 孔繁君 殷淑芳 张弘炜(21)腹腔镜下腹股沟疝修补术中腹膜前放置引流管减轻血清肿形成的 Meta分析 ?????????????????????????????????????????? 韩 曲 ... [收起]
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《南昌大学学报(医学版)》2023年第6期全文
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第2页

期刊基本参数:CN36G1323/R∗1956∗b∗A4∗106∗zh∗P∗¥20.00∗1500∗20∗2023G12

南 昌 大 学 学 报 (医 学 版)

双月刊 2023年12月 第63卷 第6期

目 次(卷终)

【基础医学】

COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮G间质转化??????????????????

???????????????????? 陈松芝 汪 杨 元文峰 曾佳伟 邹 敏 阮起超 丁 浩(1)

肾缺血再灌注致肺损伤关键基因 Alox5ap的筛选及其表达与功能验证 ?????????????

??????????????????????? 欧阳秀芳 赵 宁 付尚淼 孙智坚 钱克俭 陶文强(8)

前列腺素 F2α在小鼠月经发生过程中的作用机制????????? 田聪贵 徐 妹 潘海波 王小敏(15)

RBM43调控SlugmRNA 抑制肝癌细胞转移的机制研究 ????????? 孔繁君 殷淑芳 张弘炜(21)

腹腔镜下腹股沟疝修补术中腹膜前放置引流管减轻血清肿形成的 Meta分析 ??????????

???????????????????????????????? 韩 曲 曾 慧 汪艮亮 徐 维(27)

第3页

【临床研究】

Rotarex减容系统联合药物球囊治疗下肢动脉支架内再狭窄效果分析 ??? 呼广杰 石 磊 苟小军(33)

系统性红斑狼疮患儿治疗前血清 MIF、MMPG9水平测定及其对预后的预测价值分析 ???????

???????????????????????????????????????? 荆竹山 邱迎军(39)

枸橼酸与肝素抗凝在急性肾衰竭合并高尿酸血症间歇性肾脏替代治疗中的应用效果比较 ?????

???????????????????????????? 黄 燕 吴桃红 徐承云 黄 翀 顾云雨(44)

循环 microRNA 预测严重发热伴血小板减少综合征患者不良预后的潜力 ????????????

???????????????????????????? 何 芸 刘 霖 韩瑞萍 张 婧 吴艳霞(50)

基于时机理论的“4T”阶段干预策略联合远程医疗在泌尿造口术患者中的应用效果 ????????

???????????????????????????????? 陈诗倩 周甜甜 朱 倩 林媛珍(56)

3种不同比例血浆与红细胞输注治疗严重多发伤失血性休克的疗效分析 ????? 杨蒙蒙 周文杰(62)

慢性阻塞性肺疾病急性加重的影响因素分析及预测模型的构建与验证 ?????????? 宋丽英(67)

【综合报道】

MLN4924对宫颈癌 Hela细胞株增殖和凋亡的影响 ??????????????????? 张 智(72)

第4页

糖尿病肾病合并新型冠状病毒感染临床特征分析 ????? 蒋 兰,刘乐明 刘美玲 万灵丽 汤佳珍(76)

【综 述】

双光子钙成像技术在麻醉诱导啮齿类动物意识缺失机制研究中的应用 ?????????????

???????????????? 康细珍 郭淑月 赵心愿 董香丽 贺彬峻 马朝林 冯 珍 孙伟铭(80)

嵌合抗原受体 T 细胞免疫治疗所致细胞因子释放综合征相关细胞因子的研究进展 ????????

???????????????????????????????????????? 郭书芳 汪清铭(85)

人工智能在口腔正畸学中的应用 ????????????????????????? 傅春燕 熊 晖(90)

肾小球滤过率公式在老年人中的适用性分析 ??????????????? 段志兵 徐承云 胡丽莉(95)

【病例报告】

先天性左冠状动脉缺如合并前间壁导联异常1例 ???????? 杨 洋 詹碧鸣 吴芳琴 姜醒华(102)

毒蛇咬伤后患者行臂丛神经阻滞导致神经损伤1例 ??????????? 赵伟成 许宏森 贺 俭(105)

【读者?作者?编者】

«南昌大学学报(医学版)»稿约 ???????????????????????????????? (封二)

(本期执行责任编辑:钟荣梅)

第5页

JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)

Bimonthly Volume63 Number6 December2023

CONTENTS

COL4A1PromotesProliferation,Migration,InvasionandEpithelialGMesenchymalTransformationof

LiverCancerCells???????????????????????????? CHENSongGzhi,

WANGYang,YUAN WenGfeng,ZENGJiaGwei,ZOU Min,RUAN QiGchao,DING Hao(1)

ScreeningofKeyGeneAlox5apforRenalIschemiaGReperfusionGCausedLungInjuryandItsExpressionand

FunctionVerification

OUYANGXiuGfang,ZHAO Ning,FUShangGmiao,SUNZhiGjian,QIAN KeGjian,TAO WenGqiang(8)

??????????????????????????????????

MechanismofProstaglandinF2αActionduringMenstruationinMice

TIANCongGgui,XU Mei,PAN HaiGbo,WANGXiaoGmin(15)

???????????????

?????????????????

RBM43InhibitsLiverCancerCellMetastasisbyRegulatingSlugmRNA

KONGFanGjun,YINShuGfang,ZHANG HongGwei(21)

??????????????

????????????????????

第6页

AnteriorPeritonealDrainageTubePlacementduringLaparoscopicInguinalHerniaRepairReducesSeroma

Formation:aMetaGAnalysis ???????? HAN Qu,ZENG Hui,WANGGenGliang,XU Wei(27)

RotarexThrombectomyCombinedwithDrugGCoatedBalloonforLowerExtremityArteryInGstentRestenosis

????????????????????????? HU GuangGjie,SHILei,GOU XiaoGjun(33)

Serum MIFandMMPG9LevelsbeforeTreatmentinChildrenwithSystemicLupusErythematosusandTheir

PrognosticValues ???????????????????? JINGZhuGshan,QIU YingGjun(39)

CitrateVersusHeparinAnticoagulationinIntermittentRenalReplacementTherapyforAcuteRenalFailure

withHyperuricemia

HUANGYan,WU TaoGhong,XUChengGyun,HUANGChong,GU YunGyu(44)

??????????????????????????????????

?????????

PotentialofCirculatingMicroRNAstoPredictPoorPrognosisinPatientswithSevereFeverwith

ThrombocytopeniaSyndrome ?? HEYu,LIULin,HANRuiGping,ZHANGJing,WU YanGxia(50)

Applicationof“4T”StageInterventionStrategyBasedonTimingTheoryCombinedwithTelemedicinein

PatientswithUrostomy ???? CHENShiGqian,ZHOU TianGtian,ZHU Qian,LIN YuanGzhen(56)

第7页

EfficacyAnalysisofThreeDifferentProportionsofPlasmatoRedBloodCellInfusionforHemorrhagicShock

AccompaniedbySevereMultipleInjuries ???????? YANG MengGmeng,ZHOU WenGjie(62)

AnalysisofInfluencingFactorsandConstructionandValidationofPredictiveModelforAcuteExacerbationin

ChronicObstructivePulmonaryDiseasePatients ?????????????? SONGLiGying(67)

ApplicationofTwoGPhotonCalciumImagingintheStudyofMechanismofAnesthesiaGInducedLossof

ConsciousnessinRodents??????????????????? KANGXiGzhen,GUOShuGyue,

ZHAOXinGyuan,DONGXiangGli,HEBinGjun,MAChaoGlin,FENGZhen,SUN WeiGming(80)

ResearchProgressinCytokineReleaseSyndromeGRelatedCytokinesCausedbyCARGTCellTherapy

GUOShuGfang,WANG QingGming(85)

???

??????????????????????????

ApplicationofArtificialIntelligenceinOrthodontics ????????? FUChunGyan,XIONG Hui(90)

(Englishreviewer:ZHANGDaGlei;Englishproofreader:LISongGmin)

第8页

收稿日期:2023G04G27

基金项目:国家自然科学基金(82060443);江西省自然科学基金(20202BAB206050);

江西省卫健委科技计划项目(202210620);江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ2200169)

作者简介:陈松芝(1996—),女,硕士研究生,主要从事肝癌的研究.

通信作者:丁浩,副主任医师,EGmail:efydinghao@163.com.

COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、

侵袭和上皮G间质转化

陈松芝1,汪 杨1,元文峰2,曾佳伟2,邹 敏2,阮起超1,丁 浩1

(1.南昌大学第二附属医院消化内科,南昌 330006;2.乐安县人民医院消化内科,抚州 344000)

摘要:目的 探讨Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮G间质转化(EMT)的作用,及其上

游调控机制.方法 将 COL4A1 过 表 达 载 体、人 着 色 性 干 皮 病 基 因 (XPD)过 表 达 载 体、miRG29aG3p 模 拟 物、

miRG29aG3p抑 制 物、SiGCOL4A1、SiGXPD 按 实 验 目 的 转 染 各 组 细 胞,以 空 载 质 粒、NCG模 拟 物、NCG抑 制 物、

NCGSiRNA作为相应的对照组;qRTGPCR检测COL4A1和 XPDmRNA 水平;蛋白质印迹法检测COL4A1、XPD和

EMT相关蛋白质水平;MTT检测细胞活力;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力;萤光素酶报告基因实

验验证 miRG29aG3p和 COL4A1的靶向关系.结果 肝癌组织中 COL4A1mRNA[(3.25±1.10)vs(0.88±0.45),

P<0.01]和蛋白质[(2.58±0.50)vs(1.00±0.14),P<0.01]水平均高于癌旁组织.SMMCG7721、HepG2(P<

0.01)和 Hep3B(P<0.05)细胞株的 COL4A1mRNA 和蛋白质水平均高于 L02细胞.与 Hep3B+空载质粒相比,

过表达 COL4A1促进了 Hep3B细胞增殖[(0.48±0.06)vs(0.76±0.09),P<0.01]、迁移[(109.00±9.17)个 vs

(199.33±15.04)个,P<0.01]、侵袭[(84.67±8.02)个 vs(133.00±11.53)个,P<0.01]和 EMT(P<0.05).与

HepG2+NCGSiRNA 相比,沉默 COL4A1抑制了 HepG2细胞增殖[(0.62±0.09)vs(0.42±0.03),P<0.01]、迁移

[(173.00±12.00)个vs(75.00±7.94)个,P<0.01]、侵袭[(105.33±7.51)个vs(47.00±5.57)个,P<0.01]和EMT

(P<0.05).过表达 XPD后,HepG2细胞的 COL4A1mRNA[(1.00±0.09)vs(0.55±0.06),P<0.01]和蛋白质

[(1.00±0.09)vs(0.33±0.04),P<0.01]水平较 HepG2+空载质粒组下降,沉默 XPD 在 Hep3B细胞中出现了相

反的结果[与 Hep3B+NCGSiRNA 相比:mRNA,(1.00±0.08)vs(2.52±0.25);蛋白质,(1.00±0.09)vs(2.56±

0.36),P<0.01].转染 miRG29aG3p模拟物后,HepG2细胞中 COL4A1mRNA[(1.00±0.13)vs(0.47±0.07),P<

0.01]和蛋白质[(1.00±0.15)vs(0.36±0.09),P<0.01]水平较 NCG模拟物+HepG2下降;而 miRG29aG3p抑制物

在 Hep3B细胞中出现了相反的结果[与 NCG抑制剂+Hep3B相比:mRNA,(1.00±0.13)vs(3.30±0.41),P<

0.01;蛋白质,(1.00±0.14)vs(2.91±0.30),P<0.01].miRG29aG3p模拟物逆转了沉默 XPD 介导的 Hep3B细胞

COL4A1上调(P<0.01).结论 COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和 EMT,并受 XPDGmiRG29aG3p轴的

负性调控.

关键词:Ⅳ型胶原蛋白1;人着色性干皮病基因;miRG29aG3p;肝癌

中图分类号:R735.7;RG33 文献标志码:A 文章编号:2095G4727(2023)06-0001-07

DOI:10.13764/j.cnki.ncdm.2023.06.001

COL4A1PromotesProliferation,Migration,Invasionand

EpithelialGMesenchymalTransformationofLiverCancerCells

CHENSongGzhi1,WANGYang

1,YUAN WenGfeng

2,ZENGJiaGwei2,ZOU Min2,

RUANQiGchao1,DINGHao1

(1.DepartmentofGastroenterology,theSecondAffiliated HospitalofNanchang

University,Nanchang330006,China;2.DepartmentofGastroenterology,

Le’anPeople’sHospital,Fuzhou344000,China)

ABSTRACT:Objective ThecollagentypeⅣ alpha1(COL4A1)genehasapromotingeffecton

南昌大学学报(医学版)2023年第63卷第6期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2023,Vol.63No.6 1

第9页

varioustumors.ThisstudyexploredtheeffectsofCOL4A1ontheproliferation,migration,invaG

sion,andepithelialGmesenchymaltransition(EMT)oflivercancercells,aswellasitsupstream

regulatorymechanisms.Methods ThelivercancercellsweretransfectedwithCOL4A1overexG

pressionvector,xerodermapigmentosumgroupD(XPD)overexpressionvector,miRG29aG3pmimG

ic,miRG29aG3pinhibitor,siGCOL4A1orsiGXPDaccordingtotheexperimentalpurpose.Theempty

plasmid,NC mimic,NCinhibitorand NCsiGRNAwereusedasthecorrespondingcontrols.The

mRNAexpressionofCOL4A1andXPDwasdetectedbyqRTGPCR,andtheproteinexpressionof

COL4A1,XPDandEMT was measuredby Westernblot.Thecellviability was measuredby

MTT.ThemigrationandinvasionabilitieswereassessedbyTranswellassay.ThetargetingrelaG

tionshipbetweenmiRG29aG3pandCOL4A1wasverifiedbyluciferasereportergeneassay.Results

ThelevelsofCOL4A1 mRNAandproteinexpressioninlivercancertissueswerehigherthan

thoseinparaGcanceroustissues[(3.25±1.10)vs(0.88±0.45)and(2.58±0.50)vs(1.00±0.14),

respectively;P <0.01)],andthoseinSMMCG7721,HepG2and Hep3Bcellswerehigherthan

thosein L02 cells (P <0.01 or P <0.05).Compared with the empty plasmid group,

COL4A1overexpressionpromotedHep3Bcellproliferation[(0.48±0.06)vs(0.76±0.09),P<

0.01)],migration[(109.00±9.17)vs(199.33±15.04),P<0.01],invasion [(84.67±8.02)vs

(133±11.53),P <0.01],andEMT (P <0.05).ComparedwiththeNCGsiRNAgroup,silencing

COL4A1inhibitedHepG2cellproliferation[(0.62±0.09)vs(0.42±0.03),P<0.01],migration

[(173.00±12.00)vs(75.00±7.94),P<0.01],invasion [(105.33±7.51)vs(47.00±5.57),P<

0.01],andEMT (P<0.05).Comparedwiththeemptyplasmidgroup,XPDoverexpressionreG

ducedtheexpressionofCOL4A1mRNA [(1.00±0.09)vs(0.55±0.06),P<0.01]andprotein

[(1.00±0.09)vs(0.33±0.04),P<0.01]inHepG2cells(P<0.01).However,comparedwiththe

NCGsiRNAgroup,silencingXPDincreasedtheexpressionofCOL4A1mRNA [(1.00±0.08)vs

(2.52±0.25),P<0.01]andprotein[(1.00±0.09)vs(2.56±0.36),P<0.01]inHep3Bcells(P

<0.01).ComparedwiththeNC mimicgroup,transfectionwithmiRG29aG3pmimicdecreasedthe

expressionofCOL4A1mRNA [(1.00±0.13)vs(0.47±0.07),P<0.01]andprotein[(1.00±0.

15)vs(0.36±0.09),P<0.01]inHepG2cells.ComparedwiththeNCinhibitorgroup,themiRG

29aG3pinhibitorincreasedtheexpressionofCOL4A1mRNA [(1.00±0.13)vs(3.30±0.41),P<

0.01]andprotein[(1.00±0.14)vs(2.91±0.30),P<0.01]inHep3Bcells.ThemiRG29aG3pmimG

icreversedCOL4A1upregulationmediatedbysilencingXPDinHep3Bcells(P<0.01).ConcluG

sion COL4A1promotestheproliferation,migration,invasionandEMToflivercancercells,and

isnegativelyregulatedbyXPDGmiRG29aG3paxis.

KEY WORDS:collagentypeⅣ alpha1;xerodermapigmentosum D;miRG29aG3p;

hepatocellularcarcinoma

Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)是基底膜的组成部

分.研究表明,COL4A1 可以促进肿瘤生长,如胃

癌[1G2]和膀胱癌[3].然而,COL4A1 在肝癌进展中

的具体作用鲜有报道.人着色性干皮病基因(XPD)

参与了核苷酸切除修复过程中的 DNA 解螺旋[4],

并与多种恶性肿瘤相关.有研究[5]发现,人 XPD可

以抑制肝癌细胞的增殖和迁移.而笔者前期研究[5]

发现 XPD通过上调 miRG29aG3p抑制肝癌细胞增殖

和迁移.本文主要探讨 COL4A1在调节肝癌细胞

生物学行为中的作用,并验证其上游调控机制是否

涉及 XPDGmiRG29aG3p轴.

1 材料与方法

1.1 组织来源

所有肝癌组织(n=60)和癌旁组织(距离肿瘤

边缘至少5cm)(n=60)均来自南昌大学第二附属

医院2020—2021年收治的肝癌病例.患者在手术

前均未接受过放疗或化疗.本研究获得本院伦理委

员会批准(伦理号:2019088).所有患者已签署相关

知情同意书.

2 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第10页

1.2 主要材料

正常肝细 胞 系 (L02)和 肝 癌 细 胞 系 (SMMCG

7721、HepG2、Hep3B)购 自 美 国 菌 种 培 养 中 心

(ATCC);COL4A1过表达载体、XPD 过表达载体、

空载质粒、miRG29aG3p模拟物和阴性对照(NCG模拟

物)、miRG29aG3p抑制物和阴性对照(NCG抑制物)购

自苏 州 吉 玛 基 因 股 份 有 限 公 司;SiGCOL4A1、SiG

XPD和阴性对照(NCGSiRNA)均由生工生物工程

(上海)有限公司(SANGON)设计合成.

1.3 细胞培养

将正常肝细胞系和肝癌细胞系加入含100g?

mL-1链霉素、10%胎牛血清和100U?mL-1 青霉

素的 DMEM 培养基,置于恒温箱内,2d后更换培

养基.细胞密度为70%~80%时,用胰蛋白酶分离

细胞,取对数生长期细胞继续实验.

1.4 细胞转染

将获取的细胞接种于六孔板内,当达到70%~

80% 的 细 胞 密 度 时,采 用 Lipofectamine?2000 将

COL4A1 过 表 达 载 体、XPD 过 表 达 载 体、

miRG29aG3p 模 拟 物、miRG29aG3p 抑 制 物、SiG

COL4A1、SiGXPD按实验目的转染肝癌组织、癌旁

组织、两种肝癌细胞和正常肝细胞 L02,以空载质

粒、NCG模 拟 物、NCG抑 制 物、NCGSiRNA 作 为 相 应

的对照组.

1.5 qRTGPCR检测 COL4A1和 XPDmRNA水平

Trizol法从 肝 癌 细 胞 中 提 取 总 RNA,PrimeG

ScriptRT 试剂盒逆转录合成 cDNA,SYBR Green

PCR MasterMix进行 PCR,将 GAPDH 作为内参

标准来检测COL4A1和 XPD的表达变化,用2-ΔΔCt

法表示 COL4A1和 XPD 相对表达水平,引物序列

见表1.

表1 COL4A1、XPD和 GAPDH 的引物序列

基因 引物序列

COL4A1 上游引物 5′GTGTTGACGGCTTACCTGGAGACG3′

下游引物 5′GGGTAGACCAACTCCAGGCTCTCG3′

XPD 上游引物 5′GCCCGCTGGCATCTACAAG3′

下游引物 5′GTCCTGAGCACCGTCTTCTGG3′

GAPDH 上游引物 5′GGAAGGTCGGAGTCAACGGATG3′

下游引物 5′GCCTGGAAGATGGTGATGGGG3′

1.6 蛋白质印迹法检测 COL4A1、XPD 和上皮G间

质转化(EMT)相关蛋白质水平

RIPA 法裂解肝癌细胞后,取25μg蛋白进行

凝胶电泳.蛋白分离后,转移到 PVDF 滤过膜上,

5%脱 脂 奶 粉 溶 液 封 闭 过 夜,用 COL4A1、XPD、

NG钙黏蛋白、波形蛋白、EG钙黏蛋白、βGactin的Ⅰ抗

孵育,然后用Ⅱ抗孵育,以βGactin作为内参对照,使

用 ECLPlus试剂盒检测以上蛋白表达.

1.7 细胞活力测定

将细胞接种于96孔板,每孔加入20μL MTT

溶液(5mg?mL-1),继续孵育4h后,弃上清,添加

150μL二甲基亚砜,置微孔板振荡器上持续低速振

荡15 min.用酶免疫分析仪测定 490nm 光密度

值,重复3次.

1.8 细胞迁移和侵袭试验

在每孔8.0μm 的24孔 Transwell板上涂层 MaG

trigel基质胶.将细胞接种到上室,下室加入500μL

含10%FBS的培养液.24h后,吸取上室中的细胞

液,用棉签擦去上室中未侵袭到底部的细胞.随后用

多聚甲醇溶液固定细胞,然后用结晶紫溶液室温染

色,并用光学显微镜计算细胞侵袭数量.迁移试验

与侵袭试验方法相同,但没有用 Matrigel涂层.

1.9 萤光素酶报告基因分析

通过萤 光 素 酶 报 告 基 因 分 析 miRG29aG3p 和

COL4A13'G非编码区之间的相互作用[6].通过 PCR

扩增含有 miRG29aG3p结合位点的 COL4A13'G非编码

区序列,并将目的片段接入pGL3G萤光素酶基因载体

中.参 照 说 明 书 用 Lipofectamine? 2000 共 转 染

200ng的野生型(WT)或突变型(Mut)载体和40ng

的pRLGTK(表 达 肾 素 萤 光 素 酶 作 为 内 参 对 照)和

400ng的 miRG29aG3p模拟物或 NCG模拟物至 HepG2

细胞中.转染48h后,进行萤光素酶检测.

1.10 统计学方法

采用 GraphPadPrism7.0 软 件 进 行 统 计 分 析.

以均数±标准差(x±s)表示符合正态分布的计量

资料,采用独立样本t检验进行2组间均数比较,采

用单因素方差分析进行多组间比较.以 P <0.05

为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 COL4A1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达

水平

肝癌组织中 COL4A1mRNA[(3.25±1.10)vs

(0.88±0.45),P<0.01)]和蛋白质[(2.58±0.50)

vs(1.00±0.14),P<0.01]表达水平均高于癌旁组

织,见图1A.与正常肝细胞系 L02相比,肝癌细胞

系中 COL4A1 mRNA 和 蛋 白 质 表 达 水 平 均 升 高

[L02分别与 SMMCG7721、HepG2和 Hep3B相比:

陈松芝等:COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮G间质转化 3

第11页

mRNA,(1.00±0.09)vs (1.92±0.12),(1.00±

0.09)vs(2.54±0.41),P<0.01;(1.00±0.09)vs

(1.70±0.09),P<0.05.蛋白质,(1.00±0.08)vs

(2.00±0.2),(1.00±0.08)vs(2.26±0.20),P<

0.01;(1.00±0.08)vs(1.49±0.14),P<0.05],见

图1B.

5

4

3

2

1

0

COL4A1 m

R

N

A

癌旁组织 癌组织

* 4

3

2

1

0

COL4A1蛋

癌旁组织 癌组织

*

COL4A1

β-actin

N1 T1 N2 T2 N3 T3

A

3

2

1

0

COL4A1蛋

##

##

#

1 2 3 4

4

3

2

1

0

COL4A1 m

R

N

A

1 2 3 4

#

##

##

COL4A1

β-actin

1 2 3 4 B

A:肝癌组织与癌旁组织 COL4A1mRNA 和蛋白质表达水平;B:正常肝细胞和肝癌细胞COL4A1mRNA 和蛋白

质表达水平.N:癌旁组织;T:肝癌组织;1:L02;2:SMMCG7721;3:HepG2;4:Hep3B.n=3,∗P<0.01,# #P<

0.01、#P<0.05与 L02相比.

图1 COL4A1mRNA和蛋白质表达水平

2.2 过表达或沉默 COL4A1对肝癌细胞增殖、迁移

和侵袭的影响

在3种肝癌细胞中,HepG2细胞系中 COL4A1

表 达 最 高,Hep3B 细 胞 系 表 达 最 低,见 图 1B.

Hep3B细胞过表达 COL4A1 后,COL4A1 mRNA

水平较 Hep3B+ 空载质粒升 高 [(1.00±0.09)vs

(12.55±2.40),P <0.01];HepG2 细 胞 沉 默

COL4A1 后,COL4A1 mRNA 水 平 较 HepG2+

NCGSiRNA 下降[(1.00±0.09)vs (0.12±0.03),

P<0.01],见图2A—B.

过 表 达 COL4A1,促 进 Hep3B 细 胞 增 殖

[(0.48±0.06)vs (0.76±0.09),P <0.01],沉 默

COL4A1则 明 显 抑 制 HepG2 细 胞 增 殖 [(0.62±

0.09)vs(0.42±0.03),P<0.01],见图2C.此外,

过表达 COL4A1促进 Hep3B 细胞迁移、侵袭(P<

0.01),沉默 COL4A1抑制 HepG2细胞迁移、侵袭

(P<0.01),见表2.

20

15

10

5

0

COL4A1 m

R

N

A

空载质粒 COL4A1

A

* Hep3B

1.5

1.0

0.5

0

COL4A1 m

R

N

A

B

*

HepG2

NC-siRNA si-COL4A1

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0

力(O

D)

C

* *

1 2 3 4

A、B:过表达或沉默 COL4A1的效率;C:过表达或沉默 COL4A1(24h)对细胞增殖的影响.1:Hep3B+空载质

粒;2:Hep3B+COL4A1;3:HepG2+NCGSiRNA;4:HepG2+SiGCOL4A1.n=3,∗P<0.01.

图2 过表达或沉默 COL4A1对 COL4A1mRNA水平和肝癌细胞增殖的影响

4 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第12页

表2 Transwell实验评价2种肝癌细胞的迁移和侵袭

x±s,个

组别 n 迁移细胞数 侵袭细胞数

Hep3B+空载质粒 3 109.00±9.17 84.67±8.02

Hep3B+COL4A1 3 199.33±15.04∗ 133.00±11.53∗

HepG2+NCGSiRNA 3 173.00±12.00 105.33±7.51

HepG2+SiGCOL4A1 3 75.00±7.94# 47.00±5.57#

∗P<0.01与 Hep3B+空载质粒组比,#P<0.01与 HepG2+

NCGSiRNA 组比.

2.3 过表达或沉默COL4A1对肝癌细胞EMT的影响

过表达 COL4A1下调 Hep3B细胞 EG钙黏蛋白

水平[(1.00±0.06)vs(0.53±0.07),P<0.05],上

调 NG钙黏蛋白[(1.00±0.13)vs(2.62±0.42),P<

0.05]和波形蛋白[(1.00±0.08)vs(1.99±0.13),

P<0.05]水平,见图3A.沉默 COL4A1使 HepG2

细胞 中 EG钙 黏 蛋 白 表 达 上 调 [(1.00±0.14)vs

(2.90±0.29),P<0.05],NG钙黏蛋白[(1.00±0.08)

vs(0.47±0.05),P <0.05]和 波 形 蛋 白 [(1.00±

0.15)vs(0.60±0.05),P<0.05]表达下调,见图

3B.因此,COL4A1促进肝癌细胞 EMT.

4

3

2

1

0

EMT相

1 2 3

*

*

*

空载质粒

COL4A1 1

2

3

4

空载质粒 COL4A1

A

4

3

2

1

0

EMT相

1 2 3

*

* *

NC-SiRNA

Si-COL4A1

1

2

3

4

NC-SiRNA Si-COL4A1

B

A:过表达 COL4A1对 Hep3B细胞 EMT相关蛋白的影响;B:沉默 COL4A1对 HepG2细胞 EMT 相关蛋白的影

响.1:EG钙黏蛋白;2:NG钙黏蛋白;3:波形蛋白;4:βGactin;n=3,∗P<0.05.

图3 过表达或沉默 COL4A1对肝癌细胞 EMT的影响

2.4 过表达或沉默XPD对肝癌细胞COL4A1的影响

肝癌 组 织 中 XPD mRNA[(1.17±0.52)vs

(2.90±0.83),P<0.01]和蛋白质[(0.56±0.10)vs

(1.00±0.15),P<0.01]水平明显低于癌旁组织,见

4A—B.在 肝 癌 组 织 中,XPD mRNA 水 平 和

COL4A1 mRNA 水 平 呈 负 相 关 (R2 =0.67,P <

0.01),见图4C.2种肝癌细胞 XPD 蛋白质含量较

正常 肝 细 胞 L02 低 [HepG2:(0.41±0.04)vs

(1.00±0.08),P <0.01;Hep3B:(0.57±0.05)vs

(1.00±0.08);P<0.01],见图4D.过表达 XPD 降

低 HepG2细胞中 COL4A1 mRNA[(1.00±0.09)

vs(0.55±0.06),P<0.01]和蛋白质水平[(1.00±

0.09)vs (0.33±0.04),P <0.01],沉 默 XPD 在

Hep3B细胞中出现相反的结果[(mRNA:(1.00±

0.08)vs(2.52±0.25),P<0.01;蛋白质:(1.00±

0.09)vs(2.56±0.36),P<0.01],见图4E—F.提

示 XPD负性调控肝癌细胞 COL4A1的表达.

4

3

2

1

X

0 PD mRNA表

癌旁组织 癌组织

*

A XPD蛋

癌旁组织 癌组织

*

B

1.5

1.0

0.5

0

6

4

2

0COL4A1mRNA表达水平

C

0.5 1.0 1.5 2.0 2.5

Y=-1.727×X+5.269

R2

=0.67

P<0.01

XPD mRNA 水平

XPD蛋

L02 HepG2

D

1.5

1.0

0.5

0

#

#

HepG3

COL4A1

β-actin

1 2

COL4A1

β-actin

3 4

F

3

2

1

0

COL4A1mRNA表达水平

1 2 3 4

*

*

E

4

3

2

1

0 COL4A1蛋

质表达水平

1 2 3 4

*

*

A、B:肝癌组织和癌旁组织 XPDmRNA 和蛋白质表达水平;C:肝癌组织 XPDmRNA 与COL4A1mRNA 水平的

相关分析;D:正常肝细胞系 L02和2种肝癌细胞 XPD蛋白水平;E—F:过表达和沉默 XPD 对 COL4A1mRNA 和蛋

白质水平的影响.1:HepG2+空载质粒;2:HepG2+XPD;3:Hep3B+NCGSiRNA;4:Hep3B+SiGXPD.n=3,∗P<

0.01,#P<0.01与 L02相比.

图4 过表达和沉默 XPD对 COL4A1的影响

陈松芝等:COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮G间质转化 5

第13页

2.5 miRG29aG3p对肝癌细胞 COL4A1的影响

Targetscan(http://www.targetscan.org/)预

测发现 COL4A1是 miRG29aG3p的潜在靶点.萤光

素酶 报 告 基 因 实 验 表 明:Mut1 突 变 只 破 坏 了

COL4A13′G非编码区的第 1 个潜在结 合 位 点,而

Mut2突变只破坏了第2个位点;miRG29aG3p模拟

物转染降低了 COL4A1 WT 组 [(1.00±0.13)vs

(0.30±0.04),P<0.05]和 COL4A1 Mut1、Mut12

组[Mut1:(1.00±0.09)vs(0.67±0.08),P<0.05;

Mut2:(1.00±0.15)vs(0.54±0.07),P<0.05]的

萤光素酶活性,而对 COL4A1 Mut1+Mut2组的萤

光素酶活性没有影响,见图5.

A

1 2 3 4

1.5

1.0

0.5

0

* * * ns

B

NC-模拟物

miR-29a-3p 模拟物

1:COL4A1 WT 组;2:COL4A1 Mut1 组;3:COL4A1 Mut2 组;4:COL4A1

Mut1+Mut2组.n=3,∗P<0.05.

图5 萤光素酶报告基因实验验证 miRG29aG3p和 COL4A1的靶向关系

转 染 miRG29aG3p 模 拟 物 后,HepG2 细 胞 中

COL4A1mRNA[(1.00±0.13)vs(0.47±0.07),P<

0.01]和蛋白质[(1.00±0.15)vs(0.36±0.09),P<

0.01]水平下降;而 miRG29aG3p抑制剂在 Hep3B细胞

中出现相反的结果[mRNA:(1.00±0.13)vs(3.30±

0.41),P<0.01;蛋 白 质:(1.00±0.14)vs (2.91±

0.30),P<0.01],见图6.以上结果表明,COL4A1可

以被 miRG29aG3p直接靶向并负调控.

*

4

3

2

1

0 COL4A1mRNA表达水平

1 2 3 4

*

COL4A1

β-actin

1 2

A

*

4

3

2

1

C

0OL4A1蛋

1 2 3 4

*

COL4A1

β-actin

3 4

B

A:miRG29aG3p模拟物对 COL4A1mRNA 和蛋白质的影响;B:miRG29aG3p抑制物对 COL4A1mRNA 和蛋白质

的影响.1:HepG2+NCG模拟物;2:HepG2+miRG29aG3p模拟物;3:Hep3B+NCG抑制物;4:Hep3B+miRG29aG3p抑制

物.n=3,∗P<0.01.

图6 miRG29aG3p模拟物或抑制物对 COL4A1mRNA和蛋白质的影响

2.6 miRG29aG3p对沉默 XPD 介导的 Hep3B 细胞

COL4A1上调的影响

挽救实验结果表明:与 NCGSiRNA+NCG模拟

物相 比,沉 默 XPD 后 显 著 上 调 Hep3B 细 胞 中

COL4A1的 mRNA[(1.00±0.11)vs (2.74±

0.31),P<0.01]和蛋白质[(1.00±0.17)vs(2.67±

0.27),P<0.01]水平.这种效应可以被 miRG29aG

3p模拟物逆转[SiGXPD+NCG模拟物与 SiGXPD+

miRG29aG3p模 拟 物 比 较:mRNA,(2.74±0.31)vs

(1.56±0.12),P <0.01;蛋 白 质,(2.67±0.27)vs

(1.38±0.17),P<0.01],见图7.结果表明,miRG29aG3p

可以抑制沉默XPD介导的COL4A1表达上调.

4

3

2

1

0 COL4A1mRNA表达水平

1 2 3 4

A

**

**

#

4

3

2

1

C

0OL4A1蛋

1 2 3 4

**

*

#

COL4A1

β-actin B

1 2 3 4

A:miRG29aG3p在沉默 XPD对 Hep3B 细胞 COL4A1 mRNA 影响中的作用;B:miRG29aG3p在沉默 XPD 对

Hep3B细胞 COL4A1蛋白质影响中的作用.1:NCGSiRNA+NCG模拟物;2:SiGXPD+NCG模拟物;3:NCGSiRNA+

miRG29aG3p模拟物;4:SiGXPD+miRG29aG3p模拟物.n=3,∗∗P<0.01、∗P<0.05与 NCGSiRNA+NCG模拟

物相比;#P<0.01与SiGXPD+NCG模拟物相比.

图7 miRG29aG3p对沉默 XPD介导的 Hep3B细胞 COL4A1上调的影响

6 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第14页

3 讨论

有研究[7]表明,胶原沉积提供了支持肿瘤生长

和转移的条件.COL4A1作为基底膜的一个重要

组成部分,促进癌症进展.JIN

[8]等认为 COL4A1

促进浸润性导管癌的增殖和迁移,可作为浸润性导

管乳腺癌的不良预后标志.COL4A1可作为治疗

多种癌症的潜在靶基因,如甲状腺乳头状癌[9]、胃

癌[1]、膀胱癌[3]、头颈部鳞状细胞癌[10].LIU 等[11]

发现 COL4A1的表达与肝癌的发生、进展和预后显

著相关.此外,COL4A1 可促进肝癌细胞系增殖、

迁移和侵袭[12].

本 研 究 发 现,肝 癌 组 织 和 肝 癌 细 胞 系 中

COL4A1mRNA 和 蛋 白 均 高 表 达. WU 等[13]指

出,GTSE1能够通过调节肝癌细胞 EMT 促进肿瘤

细胞迁移和侵袭.EMT 是肝癌细胞获得转移和侵

袭的关键机制之一[14].EMT 的标志是 NG钙黏蛋

白、波形蛋白的上调和 EG钙黏蛋白的下调[15].本研

究中,COL4A1通过下调 EG钙黏蛋白的表达,增加

NG钙黏蛋白和波形蛋白的表达,对 EMT 具有诱导

作用.因此,笔者认为 COL4A1对肝癌细胞迁移和

侵袭的促进作用,部分可能是通过调节肝癌细胞的

EMT 介导的.

XPD是转录因子ⅡH(TF ⅡH)的1个亚基,

参与核苷酸切除修复过程中的 DNA 解旋[16].XPD

通过促进5'→3'解旋酶的活性解开受损部位周围的

DNA,从 而 允 许 损 伤 特 异 性 核 酸 酶 切 割 受 损 的

DNA

[17].肝脏容易癌变,因为肝细胞代谢的氧化代

谢产物 经 常 引 起 DNA 损 伤.有 研 究[18]表 明,在

HBx(乙 型 肝 炎 病 毒 X 蛋 白)转 基 因 小 鼠 肝 脏 中

XPD 低表达.后续研究[19G20]进一步证实,XPD 可

抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡过程,提示

XPD可能通过 DNA 修复机制逆转肝癌细胞的恶性

表型.前期研究[5]发现,与癌旁组织相比,肝癌组织

中 XPD 的表达下调,且与肝癌样本中 miRG29aG3p

的表达呈正相关.此外,上调 miRG29aG3p表达,从

而过表达 XPD抑制体外肝癌细胞系的增殖和迁移

以及荷瘤小鼠的异种移植瘤的生长[5].

在本研究 中,肝 癌 细 胞 中 COL4A1 被 认 为 是

miRG29aG3p的直 接 靶 点,并 受 到 XPDGmiRG29aG3p

轴的负调控.本研究证实了 XPDGmiRG29aG3p轴对

COL4A1表达的负调控作用.这为 XPD 介导的抑

制肝癌进展的作用机制提供了线索.然而,本文也

存 在 局 限 性,如 XPDGmiRG29aG3p 调 控 体 内

COL4A1表达的机制尚未阐明.为了解决这个问

题,有待进一步应用耐受异种移植物小鼠模型.应

使用更 多 的 肝 癌 组 织 样 本 验 证 XPDGmiRG29aG3pG

COL4A1 轴,进 一 步 调 查 XPD、miRG29aG3p、

COL4A1的表达和肝癌患者临床组织病理特征之

间的相关性.

总之,本研究表明 COL4A1受 XPDGmiRG29aG3p

轴 的 负 性 调 控.COL4A1 通 过 调 控 肝 癌 细 胞

EMT,促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭.COL4A1

可能作为肝癌治疗的潜在靶点.

参考文献:

[1] LIDF,WANG N N,CHANGX,etal.Bioinformaticsanalysis

suggeststhatCOL4A1 mayplayanimportantroleingastric

carcinomarecurrence[J].JDigDis,2019,20(8):391G400.

[2] HUANGR,GU W C,SUNB,etal.IdentificationofCOL4A1

asapotentialgeneconferringtrastuzumabresistanceingastric

cancerbasedon bioinformaticsanalysis[J].Mol Med Rep,

2018,17(5):6387G6396.

[3] MIYAKE M,HORIS,MORIZAWA Y,etal.CollagentypeⅣ

alpha1(COL4A1)andcollagentypeXIIIalpha1(COL13A1)

producedincancercellspromotetumorbuddingattheinvasion

frontinhumanurothelialcarcinomaofthebladder[J].OncoG

target,2017,8(22):36099G36114.

[4] RUDOLFJ,ROUILLONC,SCHWARZLINEK U,etal.The

helicaseXPDunwindsbubblestructuresandisnotstalledby

DNAlesionsremovedbythenucleotideexcisionrepairpathG

way[J].NucleicAcidsRes,2010,38(3):931G941.

[5] XIAOZH,WANGYJ,DINGH.XPDsuppressescellproliferG

ationand migrationvia miRG29aG3pGMdm2/PDGFGB axisin

HCC[J].CellBiosci,2019,9:

[6] RUANTY,HEXT,YUJ,etal.MicroRNAG186targetsyesG

associatedprotein1toinhibithipposignalingandtumorigeneG

sisinhepatocellularcarcinoma[J].OncolLett,2016,11(4):

2941G2945.

[7] XIONGGF,DENGL,ZHUJQ,etal.ProlylG4Ghydroxylaseα

subunit2promotesbreastcancerprogressionand metastasis

byregulatingcollagendeposition[J].BMCCancer,2014,14:1.

[8] JIN RZ,SHENJ,ZHANG T C,etal.Thehighlyexpressed

COL4A1genescontributestotheproliferationand migration

oftheinvasiveductalcarcinomas[J].Oncotarget,2017,8(35):

58172G58183.

[9] CONG D,HE M Z,CHEN SL,etal.Expressionprofilesof

pivotalmicroRNAsandtargetsinthyroidpapillarycarcinoma:

ananalysisofthecancergenomeatlas[J].OncoTargetsTher,

2015,8:2271G2277.

[10] KUANGJ,ZHAO M,LIHL,etal.Identificationofpotential

therapeutictargetgenesand mechanismsinheadandneck

squamouscellcarcinomabybioinformaticsanalysis[J].Oncol

Lett,2016,11(5):3009G3014.

(下转第14页)

陈松芝等:COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮G间质转化 7

第15页

收稿日期:2023G10G23

基金项目:江西省自然科学基金(20232BAB206083);江西省卫健委科技计划项目(202210371);

南昌大学第一附属医院青年人才科研培育基金(YFYPY202264)

作者简介:欧阳秀芳(1990-),女,硕士研究生,主治医师,主要从事脓毒症及多脏器功能衰竭的基础及临床研究.

通信作者:陶文强,主治医师,EGmail:ndyfy09700@ncu.edu.cn.

肾缺血再灌注致肺损伤关键基因 Alox5ap

的筛选及其表达与功能验证

欧阳秀芳,赵 宁,付尚淼,孙智坚,钱克俭,陶文强

(南昌大学第一附属医院重症医学科,南昌 330006)

摘要:目的 筛选肾缺血再灌注(RIR)致肺损伤的关键基因并对其表达与功能进行验证.方法 GEO 数据库下

载 RIR致肺损伤数据集 GSE6730,利用生物信息学方法筛选关键基因.SD大鼠按照随机数字表法分为2组:假手

术组(Sham 组)和 RIR组,每组6只;HE 染色观察2组大鼠肺组织病理形态;qRTGPCR 检测2组大鼠肺组织中

TNFGα、ILG6、ILG18及花生四烯酸5G脂氧合酶激活蛋白(Alox5ap)mRNA 的表达.常规培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细

胞 RLEG6TN,将其分为 Control组、LPS 组 (LPS 处 理)、LPS+siGNC 组 (转 染 siGNC 联 合 LPS 处 理)、LPS+siG

Alox5ap组(转染siGAlox5ap联合 LPS处理)、LPS+MKG886组(LPS联合抑制剂 MKG886处理);qRTGPCR检测各

组 TNFGα、ILG6、ILG18的 mRNA 表达.结果 Alox5ap为 RIR 致肺损伤的关键基因.与 Sham 组比较,RIR 组肺

组织见明显损伤,TNFGα、ILG6、ILG18及 Alox5apmRNA 表达均增加(P<0.05).与 Control组比较,LPS组 TNFGα、

ILG6、ILG18mRNA 表达均升高(P<0.05);与 LPS+siGNC 组比较,LPS+siGAlox5ap组的 TNFGα、ILG6、ILG18的

mRNA 表达均降低(P<0.05);与 LPS组比较,LPS+MKG886组的 TNFGα、ILG6、ILG18的 mRNA 表达均降低(P<

0.05).结论 成功筛 选 RIR 致 肺 损 伤 关 键 基 因 Alox5ap,RIR 致 肺 损 伤 后 肺 组 织 中 Alox5ap 表 达 升 高;下 调

Alox5ap表达可减轻 LPS诱导肺损伤的炎症因子表达.

关键词:肺损伤;肾缺血再灌注;生物信息学;花生四烯酸5G脂氧合酶激活蛋白;动物,实验;大鼠

中图分类号:R629.2 文献标志码:A 文章编号:2095G4727(2023)06-0008-07

DOI:10.13764/j.cnki.ncdm.2023.06.002

ScreeningofKeyGeneAlox5apforRenal

IschemiaGReperfusionGCaused

LungInjuryandItsExpressionandFunctionVerification

OUYANGXiuGfang,ZHAONing,FUShangGmiao,SUNZhiGjian,QIANKeGjian,TAO WenGqiang

(DepartmentofCriticalCareMedicine,the1st Affiliated Hospital,

JiangxiMedicalCollege,NanchangUniversity,Nanchang,330006,China)

ABSTRACT:Objective ToscreenthekeygenesforlunginjuryinducedbyrenalischemiaGreperG

fusion(RIR),andtoverifytheirexpressionandfunction.Methods ThedatasetGSE6730ofRIRG

inducedlunginjurywasdownloadedfromGeneExpressionOmnibus(GEO)database,andthekey

geneswerescreenedbybioinformaticsanalysis.TwelveSDratswererandomlydividedintosham

groupandRIRgroup,with6ratsineachgroup.PathologicalchangesinthelungtissuewereobG

servedbyH&Estaining.ThemRNAexpressionofarachidonicacid5GlipoxygenaseGactivatedproG

tein(Alox5ap)inthelungtissuewasdeterminedbyqRTGPCR.RatalveolartypeⅡepithelialcells

(RLEG6TN)wereroutinelycultured,anddividedintocontrolgroup,lipopolysaccharide(LPS)

8 南昌大学学报(医学版)2023年第63卷第6期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2023,Vol.63No.6

第16页

group(cellsweretreatedwithLPS),LPS+siGNCgroup(cellsweretransfectedwithsiGNCand

treatedwithLPS),LPS+siGAlox5apgroup(cellsweretransfectedwithsiGAlox5apandtreated

withLPS),andLPS+MKG886group(cellsweretreatedwithLPSandMKG886).ThemRNAexG

pressionlevelsoftumornecrosisfactorGα(TNFGα),interleukin(IL)G6andILG18inthelungtissue

andcellsweredetectedbyqRTGPCR.Results Alox5apwasscreenedasakeygeneinlunginjury

inducedbyRIR.Comparedwiththeshamgroup,lungtissuewasobviouslydamagedandtheexG

pressionlevelsofTNFGα,ILG6,ILG18andAlox5apweresignificantlyincreasedintheRIRgroup

(P<0.05).TheexpressionlevelsofTNFGα,ILG6andILG18intheLPSgroupwashigherthan

thoseinthecontrolgroup,butthoseintheLPS+siGAlox5apgroupwerelowerthanthoseinthe

LPS+siGNCgroup(P<0.05).Inaddition,theexpressionlevelsofTNFGα,ILG6andILG18inthe

LPS+MKG886groupwerelowerthanthoseintheLPSgroup(P<0.05).Conclusion Thekey

geneAlox5apforRIRGcausedlunginjurywassuccessfullyscreened,andAlox5apexpressioninG

creasedinthelungtissueafterlunginjuryinducedbyRIR.ThedownregulationofAlox5apexG

pressioncouldreducetheexpressionofinflammatoryfactorsinLPSGinducedlunginjury.

KEY WORDS:lunginjury;renalischemiaGreperfusion;bioinformatics;

arachidonicacid5Glipoxygenaseactivatingprotein;animals,experiments;rats

肾 缺 血 再 灌 注 (renalischemiaGreperfusion,

RIR)损伤是临床急性肾损伤的常见原因,易并发多

器官功能障碍,其中肺脏是最易受损的器官,是 RIR

相关死亡的主要原因[1G3].目前,RIR致急性肺损伤

(acutelunginjury,ALI)的治疗方法有限且效果不

佳,因此有必要进一步探索 RIR致 ALI的病理生理

机制,以期找到潜在的治疗靶点.

有研究[4G5]发现,RIR后肺组织的细胞凋亡和脂

质过氧化参与 ALI.RIR后释放的促炎因子会诱发

体内炎性级联反应导致 ALI,表现为肺血管通透性

增加、间质水肿、肺泡出血和红细胞淤积[6G7].DU

等[8]发现 RIR后 ALI与中性粒细胞聚集、中性粒细

胞外泌体形成密切相关.但 RIR 导致 ALI的确切

分子机制尚不完全清楚.本研究旨在利用 GEO 数

据库和 R 语 言 等 生 物 信 息 学 方 法 筛 选 出 RIR 致

ALI的关键基因,并进行关键基因 mRNA 表达及

功能的验证,以初步了解其与 RIR 致 ALI的关系,

为临床治疗提供新的策略.

1 材料与方法

1.1 材料

6~8周龄 SPF 级 SD 雄性大鼠12只,均购于

江西中 医 药 大 学 实 验 动 物 中 心,动 物 许 可 证 号:

SCXK(赣)2018G0003,体重280~350g.所有动物

饲养和实验流程均通过南昌大学第一附属医院实验

动物 福 利 伦 理 委 员 会 审 查,批 准 文 号:CDYFYG

IACUCG202205GR012.大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系

RLEG6TN、F12培养基均购自赛百慷(上海)生物技

术股份有限公司;Lipo8000TM 转染试剂购自上海碧

云天生物技术有限公司;引物序列购自北京擎科生

物科技股份有限公司;脂多糖(LPS)购自美国 SigG

maGAldrich公司;MKG886(Alox5ap抑制剂)购自美

国 MCE公司;“哧溜”极速反转录试剂盒购自北京

聚合美生物科技有限公司;染料法荧光定量预混试

剂购自北京全氏金生物技术股份有限公司.

1.2 方法

1.2.1 共同差异表达基因的筛选

在 GEO 数 据 库 (https://www.ncbi.nlm.nih.

gov/geo/)中 以 “Renalischemiareperfusion and

lung”为关键词检索,下载 RIR 致肺损伤的数据集

GSE6730,利 用 R 语 言 的 limma 包 对 数 据 集

GSE6730进 行 归 一 化 处 理,分 别 筛 选 Ctr6h 组 与

RIR6h组、Ctr36h组与 RIR36h组的差异表达基因

(differentiallyexpressedgenes,DEGs),筛 选 条 件

为P<0.05,|log2FC|>1,绘制火山图.利用 R 语

言的 RRA(RobustRankAggreg)包筛选其共同差异

表达基因(commonDEGs,cDEGs),取上调和下调

前20位的cDEGs绘制热图.

1.2.2 GO 与 KEGG 富集分析

利用 R 语言 clusterProfiler包对 cDEGs分别

进行 GO(GeneOntology)和 KEGG(KyotoEncyG

clopediaofGenesandGenomes)富集分析,以校正

P<0.05为差异有统计学意义.利用 R 语言的ggG

plot2包绘制富集分析结果的气泡图.GO 功能富

集分析包括细胞成分(cellularcomponent,CC)、生

物学过程(biologyProcess,BP)和分子功能(molecG

欧阳秀芳等:肾缺血再灌注致肺损伤关键基因 Alox5ap的筛选及其表达与功能验证 9

第17页

ularfunction,MF).

1.2.3 构建蛋白质互作网络并筛选关键基因

在 STRING 数 据 库 (https://cn.stringGdb.

org/)中导入cDEGs,构建蛋白质互作(proteinGproG

teininteraction,PPI)网络.将 STRING 得到的结

果 导 入 Cytoscape 软 件,采 用 MCODEMolecular

COmplexDEtection(MCODE)插件对 PPI网络进

行聚类分析,使用 Cytohubba插件的度数(degree)、

边缘渗透分量(edgepercolatedcomponent,EPC)、

最大邻域分量密度(densityofmaximumneighborG

hoodcomponent,DMNC)和最大团簇中心度(maxG

imalcliquecentrality,MCC)等4种拓扑分析方法,

计算功能集群1中排列前五的cDEGs,将上调和下

调排列各前20位cDEGs和功能集群1中排列前5

的cDEGs取 交 集,利 用 在 线 网 站 (https://bioinG

fogp.cnb.csic.es/tools/venny/)绘制韦恩图.

1.2.4 大鼠 RIR致肺损伤模型的建立及分组

将12只SD大鼠按照随机数字表法分为2组:

假手术组(Sham 组)和肾缺血再灌注组(RIR 组),

每组6只.根据 LI等[9]方法建立大鼠 RIR 致肺损

伤模型.具体方法:大鼠腹腔注射1.5%戊巴比妥

钠(50mg?kg

-1)麻醉后,行腹部正中切口,以动脉

夹夹闭双侧肾蒂,双肾颜色由鲜红转为暗红表明肾

缺血;缺血30min后松开动脉夹,双肾颜色由暗红

变为鲜红表明再灌注.Sham 组双侧肾蒂游离后缝

合腹腔.于再灌注24h后收集肺组织标本.

1.2.5 细胞培养及分组

RLEG6TN 细胞用含10%胎牛血清和1%青霉

素/链霉素的F12培养基常规培养于37℃、5%CO2

培养箱中.根据 ZHU 等[10]方法用 LPS刺激RLEG6

TN细胞构建 ALI体外模型.将对数生长期 RLEG6

TN细胞分为5组:Control组、LPS组、LPS+siGNC

组、LPS+siGAlox5ap组、LPS+MKG886 组.细胞

接种于6孔培养板内,采用lipo8000转染试剂分别

将siGNC和siGAlox5ap转染至对应组细胞中.转染

48h 后,将 LPS (15 μg ? mL-1 )和 MKG886

(10μmol?L-1)分 别 加 入 对 应 组 的 细 胞 中,培 养

24h后进行qRTGPCR检测.

1.2.6 实时荧光定量聚合酶链反应(qRTGPCR)

使用 M5TotalRNAExtraxtionReagent提取

肺组织和 RLEG6TN 细胞总 RNA.使用“哧溜”极

速反转录试剂盒将 RNA 逆转录为cDNA.使用染

料法荧光定量预混试剂进行 qRTGPCR 检测,反应

条件为:94 ℃ 30s,94 ℃ 5s,60 ℃ 30s(40个循

环).引物序列见表1.

表1 qRTGPCR引物序列

基因名称 正向引物 反向引物

GAPDH GTCATCAACGGGAAACCCAT ACGCCAGTAGACTCCACGACAT

TNFGα ATGGGCTCCCTCTCATCAGT GCTTGGTGGTTTGCTACGAC

ILG6 CCAGTTGCCTTCTTGGGACT TGCCATTGCACAACTCTTTTC

ILG18 CAGCTCTTCTACCAGCAAACAT CTTCCAACTGAGAGGCTGTGC

Alox5ap TCATCAGCGTGGTCCAGAAC TACGCAGTTCTGGTTGGCAG

1.2.7 HE染色

大鼠左肺组织用冰磷酸盐缓冲液漂洗后,置于

4%多聚甲醛中固定48h,取出组织后流水冲洗 3

次;将组 织 依 次 放 入 浓 度 梯 度 (50%、75%、85%、

95%、100%)的 乙 醇 中 脱 水,再 依 次 放 入 100% 乙

醇+二甲苯等量混合液、二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ溶液中

透明;石蜡包埋后连续冠状切片,厚度约3 mm;将

切片脱蜡至水后依次放入苏木精水溶液3 min、盐

酸乙醇分化液15s、稍水洗、返蓝液15s、流水冲洗、

伊红染色液3min,流水冲洗多余染料,脱水透明后

封片.在三目光学显微镜(CarlZeissAG,德国)下

观察肺组织形态学变化.

1.2.8 统计学方法

采用 SPSS26.0软件和 GraphPadPrism9.0对

数据进行处理.计量数据以均数 ± 标准差表示,2

组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单

因素方差分析.以P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 RIR致肺损伤的cDEGs

Ctr6h组与 RIR6h组的 DEGs共374个.见图

1A.Ctr36h组与 RIR36h 组的 DEGs共 1377 个.

图1B.Ctr6h组与 RIR6h组、Ctr36h组与 RIR36h

组的cDEGs共84个,其中上调基因48个、下调基

因36个,取上调和下调排列各前20位cDEGs绘制

的热图见图1C.

10 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第18页

C

B A

A:Ctr6h组与 RIR6h组的 DEGs;B:Ctr36h组与 RIR36h组的 DEGs;C:cDEGs.

图1 RIR致肺损伤 DEGs的火山图和热图

2.2 cDEGs的富集分析

对84个cDEGs进行 GO 和 KEGG 富集分析.

GO 分析结果显示,BP主要在免疫、细菌反应、缺氧

反应、细胞 表 面 受 体 信 号 等 富 集;CC 主 要 在 细 胞

质、胞外空间、质膜外侧、细胞表面等富集;MF主要

在肽酶抑制活性、丝氨酸型肽酶抑制剂活性、跨膜信

号受体活性等聚集.KEGG 通路分析主要涉及破

骨细胞分化、马达蛋白、TNF信号通路、中性粒细胞

外泌体形成等信号通路.见图2.

B A

A:GO 功能富集分析;B:KEGG 通路富集分析.

图2 cDEGs富集分析的气泡图

2.3 cDEGs的PPI网络及关键基因

利用STRING 数据库构建由82个节点(靶点

蛋白)和145条边(蛋白相互作用)组成的PPI网络.

见图3A.使用 Cytoscape软件中 MCODE 插件进

一步分析得到5个功能集群,采用 Degree、DMNC、

MCC、EPC等四种拓扑分析方法得到评分最高的功

能集群1中排列前5的cDEGs.见表2.将上调和

下调排列各前20位cDEGs和功能集群1中排列前

5的cDEGs绘制韦恩图确定唯一交集是 Alox5ap.

见图3B.

表2 功能集群1中排列前5的差异基因

序号 基因名称

分析方法

Degree DMNC MCC

序号 基因名称

分析方法

EPC

1 Alox5ap 6 0.665688279 240 1 Ncf2 2.828

2 Fcer1g 6 0.665688279 240 2 Ncf4 2.826

3 Ncf4 6 0.665688279 240 3 Alox5ap 2.775

4 Pirb 6 0.665688279 240 4 Pirb 2.774

5 Ncf2 6 0.665688279 240 5 Fcer1g 2.759

欧阳秀芳等:肾缺血再灌注致肺损伤关键基因 Alox5ap的筛选及其表达与功能验证 11

第19页

A B

A:PPI网络图;B:上下调排列各前20位的cDEGs和功能集群1中排列前5的cDEGs韦恩图.

图3 PPI网络图及关键基因筛选

2.4 2 组 大 鼠 肺 组 织 病 理 形 态、炎 症 因 子 及

Alox5apmRNA表达比较

HE染色显示:Sham 组肺组织结构完整、肺泡

间隔均匀一致、可见少量炎性细胞浸润;RIR组肺组

织水肿、间质炎症、出血、大量炎性细胞浸润.见图

4A.qRTGPCR 结果显示:与 Sham 组比较,RIR 组

TNFGα、ILG6、ILG18及 Alox5apmRNA 表达均增加

(P<0.05).见图4B.

Sham RIR

A

B

2.0

1.5

1.0

0.5

0.0

Sham RIR

TNF-α m

R

N

A

3

2

1

0

Sham RIR

IL-6 m

R

N

A

4

3

2

1

0

Sham RIR

IL-18 m

R

N

A

3

2

1

0

Sham RIR

Alox5ap m

R

N

A

B

A:HE染色;B:qRTGPCR.∗P<0.05,∗∗P<0.01.

图4 2组肺组织病理形态、炎症因子及 Alox5apmRNA表达

2.5 Alox5ap表达下调降低 LPS刺激的 RLEG6TN

细胞炎症因子的表达

qRTGPCR 结 果 显 示:与 siGNC 组 比 较,siG

Alox5ap组 Alox5ap mRNA 表 达 水 平 降 低 (P <

0.05).见 图 5A. 较 Control组,LPS 组 TNFGα、

ILG6、ILG18表达量增加(P<0.05);与 LPS+siGNC

组比较,LPS+siGAlox5ap组 TNFGα、ILG6、ILG18表

达均下降(P <0.05);与 LPS 组比较,LPS+ MKG

886组 TNFGα、ILG6、ILG18表达均下降(P<0.05).

见图5.

12 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第20页

Alox5ap m

R

N

A

1.5

1.0

0.5

0.0

A B

IL-6 m

R

N

A

5

4

3

2

1

0

1 2 3 4 5

△ △

TNF-α m

R

N

A

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

0.0

1 2 3 4 5

#

IL-18 m

R

N

A

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

0.0

1 2 3 4 5

A:siGNC组;B:siGAloxap组;1:Control组;2:LPS组;3:LPS+siGNC组;4:LPS+siGAlox5ap组;5:LPS+

MKG886组.∗P<0.05,#P<0.001,△P<0.0001.

图5 各组 RLEG6TN细胞中炎症因子的表达

3 讨论

严重肾损伤时,肾G肺相互作用导致 ALI的发

病率大大增加[11].目前已知 RIR 致 ALI的关键因

素有炎症级联反应、氧化应激、细胞凋亡等[4,6],然

而对于 RIR所致 ALI的更深层次的发病机制及治

疗仍处于探索阶段.

生物信息学已广泛应用于各种疾病发生发展的

机制探索.本研究利用 GEO 数据库和 R 语言对

RIR 致肺损伤数据集 GSE6730 进行分析,筛选出

48个上调基因和36个下调基因,共84个cDEGs.

GO 功能富集分析结果提示cDEGs在 BP方面主要

富集在免疫、细菌反应、缺氧反应、细胞表面受体信

号等.现有研究[12]证实,在 RIR 小鼠中 CD8+ T 细

胞在急性肾损伤后24h内转移至肺部并参与 ALI

的发 生 发 展.KEGG 信 号 通 路 富 集 分 析 显 示

cDEGs主要涉及破骨细胞分化、马达蛋白、TNF信

号通 路、中 性 粒 细 胞 外 泌 体 形 成 等 通 路.而 DU

等[8]研究亦发现 RIR后 ALI与中性粒细胞聚集、中

性粒细胞外泌体形成密切相关.此外,RIR 还可激

活 TNF信号通路下游的 NFGκB信号通路,参与肾G

肺串扰[6].STRING 数据库系统地收集和整合蛋

白质之间的相互作用,包括直接的物理相互作用和

间接的功能关联,可分析已知蛋白和预测蛋白之间

的相 互 作 用[13],而 Cytoscape软 件 的 MCODE 和

Cytohubba插件常用于寻找核心网络和关键基因.

本研究利用上述数据库和插件成功筛选获得 RIR

致 ALI的关键基因 Alox5ap.

体内实验证实 Alox5ap在 RIR 后肺组织中高

表达,与差异表达分析的结果相一致.Alox5ap基

因 编 码 花 生 四 烯 酸 5G脂 氧 合 酶 激 活 蛋 白

(ALOX5AP).迄今为止,ALOX5AP 已被证实在

癌症[14]、动 脉 粥 样 硬 化[15]、缺 血 性 卒 中[16]、糖 尿

病[17]等诸多疾 病 中 起 重 要 作 用.本 研 究 发 现,当

Alox5ap表达被抑制时,LPS处理的 ALI体外模型

中 TNFGα、ILG6、ILG18的表达下降,表明细胞炎症

反应减轻,提示 Alox5ap在 ALI中起重要作用.有

研究[18]发 现,在 亨 廷 顿 舞 蹈 病 中,多 聚 谷 氨 酰 胺

HTTQ94通过稳定 ALOX5AP 来激活 ALOX5介

导的铁死亡.铁死亡是一种铁依赖性的新型细胞死

亡形式,其特征是活性氧(reactiveoxygenspecies,

ROS)的积累和脂质过氧化[19].ROS和脂质过氧

化在 RIR 远 隔 器 官 损 伤 中 起 着 重 要 作 用.有 研

究[20G22]显示,RIR可引起 ROS水平升高,从而介导

MAPK/NFGκB促炎级联反应,诱导远隔器官的炎

性反应,最终造成远隔器官的损伤.大鼠肺组织在

RIR后脂质过氧化明显增加,而雷帕霉素和伞形酮

可通 过 抗 氧 化 应 激 和 抗 炎 作 用 减 轻 RIR 诱 导 的

ALI

[20G23].这些研究提示,Alox5ap 可能通过铁死

亡调控 RIR诱导 ALI,但其作用需进一步探讨.

综上,本 研 究 利 用 生 物 信 息 学 分 析 成 功 筛 选

RIR致 ALI的关键基因 Alox5ap,该基因在 RIR 致

肺损伤的肺组织中表达升高.抑制 Alox5ap的表

达能减轻 LPS诱导 ALI的炎症反应.这些结果可

望为 RIR致 ALI的发病机制研究提供新的方向.

参考文献:

[1] LIUZH,ZHANGJ,ZHANGF,etal.PropofolpostGconditionG

inglessensrenalischemia/reperfusionGinducedacutelunginjuG

ryassociated withautophagyandapoptosisthrough MAPK

signalsinrats[J].Gene,2020,741:144562.

[2] HASHEMISS,JANFESHANS,KARIMIZ.Acutelunginjury

inducedbyacuteuremiaandrenalischemicGreperfusioninjury:the

roleoftollGlikereceptors2and4,andoxidativestress[J].IranJ

BasicMedSci,2022,25(5):643G651.

[3] ROSSI M,DELBAUVE S,ROUMEGUÈRE T,etal.HOG1

mitigatesacute kidney injury and subsequent kidneyGlung

crossGtalk[J].FreeRadicRes,2019,53(9/10):1035G1043.

[4] 许辉,疏树华,王迪,等.磷酸肌酸预处理对大鼠肾缺血G再灌注

所致肺损伤的影响[J].临床麻醉学杂志,2019,35(1):61G65.

[5] 吴艳,张铭,鲁开智,等.腺苷 A2b受体激活减轻小鼠肾缺血再

灌注致肺损伤[J].基础医学与临床,2019,39(8):1102G1107.

[6] MENGC,QIANY,ZHANGC,etalI.KKεdeficiencyinhibitsacute

lunginjuryfollowingrenalischemiareperfusioninjury[J].MolMed

Rep,2020,22(5):4213G4220.

欧阳秀芳等:肾缺血再灌注致肺损伤关键基因 Alox5ap的筛选及其表达与功能验证 13

第21页

[7] WHITELE,CUIY,SHELAKC M F,etal.Lungendothelial

cellapoptosisduringischemicacutekidneyinjury[J].Shock,

2012,38(3):320G327.

[8] DU MJ,YANG L,GUJM,etal.InhibitionofpeptidylargiG

ninedeiminaseG4preventsrenalischemiaGreperfusionGinduced

remotelung injury [J].Mediators Inflamm,2020,2020:

1724206.

[9] LIJJ,CHEN Q,HEX H,etal.Dexmedetomidineattenuates

lungapoptosisinduced byrenalischemiaGreperfusioninjury

throughα2AR/PI3K/Aktpathway[J].JTranslMed,2018,16

(1):78.

[10] ZHU M,WANGL,YANGJ,etal.Erythropoietinameliorates

lunginjurybyacceleratingpulmonaryendotheliumcellprolifG

erationviaJanuskinaseGsignaltransducerandactivatorof

transcription3pathwayafterkidneyischemiaandreperfusion

injury[J].TransplantProc,2019,51(3):972G978.

[11] GRAMS M E,RABB H.Thedistantorganeffectsofacute

kidneyinjury[J].KidneyInt,2012,81(10):942G948.

[12] LIE M L,WHITELE,SANTORA RJ,etal.LungTlymG

phocytetraffickingandactivationduringischemicacutekidG

neyinjury[J].JImmunol,2012,189(6):2843G2851.

[13] SZKLARCZYK D,KIRSCH R,KOUTROULIM,etal.The

STRING databasein2023:proteinGproteinassociation netG

worksandfunctionalenrichmentanalysesforanysequenced

genomeofinterest[J].Nucleic Acids Res,2023,51(D1):

D638GD646.

[14] YE X,AN L M,WANG X X,etal.ALOX5APpredictspoor

prognosisbyenhancingM2macrophagespolarizationandimmuG

nosuppressioninserousovariancancermicroenvironment[J].

FrontOncol,2021,11:675104.

[15] BÄCK M,SULTAN A,OVCHINNIKOVA O,etal.5GLiG

poxygenaseGactivatingprotein:apotentiallinkbetweeninnate

andadaptiveimmunityinatherosclerosisandadiposetissue

inflammation[J].CircRes,2007,100(7):946G949.

[16] ZHENGJH,NINGGL,XU W H,etal.Lackofassociation

betweenALOX5APgeneticpolymorphismsandriskofischeG

micstroke:evidencefrom metaGanalyses[J].Neuropsychiatr

DisTreat,2019,15:357G367.

[17] CILENŠEKI,ŠERUGA M,MAKUCJ,etal.TheALOXA5AP

gene(rs38022789)isassociatedwithdiabeticnephropathyin

Slovenianpatientswithtype2diabetes mellitus[J].Gene,

2020,741:144551.

[18] SONGSJ,SUZY,KON N,etal.ALOX5Gmediatedferroptosis

actsasadistinctcelldeathpathwayuponoxidativestressinHunG

tington’sdisease[J].GenesDev,2023,37(5/6):204G217.

[19] DIXONSJ,LEMBERGK M,LAMPRECHTMR,etal.FerropG

tosis:anironGdependentformofnonapoptoticcelldeath[J].Cell,

2012,149(5):1060G1072.

[20] ICOGLU AKSAKALF,KOC K,GEYIKOGLU F,etal.AG

meliorativeeffectofumbelliferoneinremoteorganinjuryinG

ducedbyrenalischemiaGreperfusioninrats[J].JFoodBioG

chem,2021,45(2):e13628.

[21] HAN YK,KIMJS,LEEGB,etal.OxidativestressfollowG

ingacutekidneyinjurycausesdisruptionoflungcellciliaand

theirreleaseintothebronchoaveolarlavagefluidandlunginG

jury,whichareexacerbatedbyIdh2deletion[J].RedoxBiol,

2021,46:102077.

[22] WUCK,WU CL,LEE TS,etal.Renaltubularepithelial

TRPA1actsasanoxidativestresssensortomediateischemiG

aGreperfusionGinducedkidneyinjurythrough MAPKs/NFGκB

signaling[J].IntJMolSci,2021,22(5):2309.

[23] 黄丹,唐斌,罗振中.雷帕霉素预处理对大鼠肾缺血再灌注诱

发肺损伤的影响[J].南昌大学学报(医学版),2014,54(12):

25G27.

(责任编辑:黄永红)

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(上接第7页)

[11] LIU Y L,ZHANGJY,CHEN Y,etal.Thecorrelationand

roleanalysisofCOL4A1andCOL4A2inhepatocarcinogeneG

sis[J].Aging(AlbanyNY),2020,12(1):204G223.

[12] WANG T,JIN H J,HUJY,etal.COL4A1promotesthe

growthand metastasisofhepatocellularcarcinomacellsby

activatingFAKGSrcsignaling[J].J Exp Clin Cancer Res,

2020,39(1):148.

[13] WUXJ,WANG HB,LIANYF,etal.GTSE1promotescell

migrationandinvasionbyregulatingEMTinhepatocellular

carcinomaandisassociatedwithpoorprognosis[J].SciRep,

2017,7(1):5129.

[14] ZHANG D,ZHOU P H,WANG W,etal.MicroRNAG616

promotesthemigration,invasionandepithelialGmesenchymal

transitionofHCCbytargetingPTEN[J].OncolRep,2016,35

(1):366G374.

[15] PANS,ANL W,MENGX,etal.MgCl2andZnCl2promotehuG

manumbilicalveinendothelialcellmigrationandinvasionand

stimulateepithelialGmesenchymaltransitionviatheWnt/βGcatenin

pathway[J].ExpTherMed,2017,14(5):4663G4670.

[16] YAND,LIANG X H,DING W,etal.ContributionofDNA

repairxerodermapigmentosumgroupDgenotypestopancreG

aticcancerriskintheChineseHanpopulation[J].GenetMol

Biol,2018,41(1):18G26.

[17] VAN EEUWENT,SHIM Y,KIM HJ,etal.CryoGEMstructure

ofTFIIH/Rad4GRad23GRad33indamagedDNAopeninginnucleG

otideexcisionrepair[J].NatCommun,2021,12(1):3338.

[18] DING H,XU JJ,HUANG Y,etal.XPDcouldsuppress

growthofHepG2.2.15anddownGregulatetheexpressionof

hepatitisBvirusxproteinthroughP53pathway[J].Biochem

BiophysResCommun,2012,419(4):761G767.

[19] WANG H Y,XIONG G F,ZHANGJX,etal.Theroleof

XPDincellapoptosisandviabilityanditsrelationshipwith

p53andcdk2inhepatomacells[J].MedOncol,2012,29(1):

161G167.

[20] DING H,WENZL,SUNGF.SilencingofxerodermapigmentoG

sumgroupDgenepromoteshepatomacellgrowthbyreducing

P53expression[J].MedSciMonit,2018,24:8015G8021.

(责任编辑:钟荣梅)

14 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第22页

收稿日期:2023G05G27

基金项目:广东省卫健委科研项目(2021AW203)

作者简介:田聪贵(1975—),女,硕士,副主任医师,主要从事高危妊娠诊治及难产处理的研究.

通信作者:王小敏,主任医师,EGmail:pour201009@163.com.

前列腺素F2α在小鼠月经发生过程中的作用机制

田聪贵a,徐 妹b,潘海波c,王小敏a

(深圳市龙岗区第二人民医院a.产科;b.妇科;c.麻醉科,广东 深圳 518000)

摘要:目的 探究子宫内膜中的前列腺素 F2α(PGF2α)在月经发生过程中对子宫内膜修复的作用.方法 建立

小鼠月经样模型,在黄体酮(P4)植入物移除时(T0)或移除后8h(T8)或24h(T24)通过颈椎脱位处死小鼠,并收集

子宫.使用免疫组织化学研究哌莫硝唑和PGF2α蛋白染色的定位.在P4植入物移除前1d给予小鼠 ALG8810处

理,以抑制 PGF2与其受体的结合.通过组织学分析对小鼠子宫内膜的破裂/修复阶段进行分级,用 qPCR 检测

PGF2α的下游靶标(VEGF、Glut1)和炎症介质(CXCL1、TNFGα)表达.通过体外细胞培养实验观察来自 PGF2α沉

默的人内皮细胞条件培养基对人脐带血管内皮细胞(HUVEC)分支形成的影响.结果 T8时,月经样模型小鼠子

宫内膜组织中哌莫硝唑染色和 PGF2α染色百分比较 T0时显著增 加(P<0.05),并 且 T24 时 哌 莫 硝 唑 染 色 和

PGF2α染色百分比较 T8时显著减少(P<0.05).T24时,溶剂对照组子宫内膜修复明显,而 ALG8810组与 T8时

相比差异无统计学意义(P>0.05).与溶剂对照组相比,ALG8810组小鼠的子宫内膜中 VEGF mRNA 和 Glut1

mRNA 在 T8时显著降低(P<0.001),并且 CXCL1mRNA 和 TNFGαmRNA 在 T24时显著降低(P<0.01).向

HUVEC细胞中添加在缺氧条件 下 生 长 的 转 染 shGPGF2α的 上 皮 细 胞 条 件 培 养 基,其 分 支 数 目 显 著 减 少(P<

0.01).结论 缺氧和 PGF2α在生理性子宫内膜修复中发挥重要作用,促进 PGF2α生成可作为月经失调的潜在治

疗靶点.

关键词:前列腺素 F2α;月经;子宫内膜;缺氧;动物,实验;小鼠

中图分类号:R339.22 文献标志码:A 文章编号:2095G4727(2023)06-0015-06

DOI:10.13764/j.cnki.ncdm.2023.06.003

MechanismofProstaglandinF2αActionduring

MenstruationinMice

TIANCongGguia,XU Meib,PANHaiGboc,WANGXiaoGmina

(a.DepartmentofObstetrics;b.DepartmentofGynecology;c.DepartmentofAnesthesiology,

theSecondPeople’sHospitalofLonggangDistrict,Shenzhen518000,China)

ABSTRACT:Objective ToinvestigatetheroleofprostaglandinF2α(PGF2α)inendometrialreG

pairduring menstruation.Methods A mouse menstrualGlike modelwasestablished.The mice

werekilledbycervicaldislocationtocollecttheuterusatthetimeofprogesterone(P4)implant

removal(T0),and8h(T8)and24(T24)hafterP4withdrawal.Thelocalizationofpemonidazole

andPGF2α wasobservedbyimmunohistochemicalstaining.Furthermore,the miceweregiven

ALG8810at1daybeforeP4withdrawaltoinhibitthebindingofPGF2αtoitsreceptor.HistologiG

calanalysiswasusedtoclassifytherupture/repairstage,andqPCRwasperformedtodetectthe

expressionofPGF2αdownstreamtargets(VEGFandGlut1)andinflammatorymediators(CXCL1

andTNFGα).Inaddition,invitroexperimentswereconductedtoobservetheeffectofconditioned

mediumfrom PGF2αGsilencedhumanendothelialcellsonbranchformationofhumanumbilical

vascularendothelialcells(HUVEC).Results Thepercentagesofpimonidazolestainingand

南昌大学学报(医学版)2023年第63卷第6期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2023,Vol.63No.6 15

第23页

PGF2αstainingatT8werehigherthanthoseatT0,andthoseatT24werelowerthanthoseatT8

(P<0.05).AtT24,endometrialrepairwassignificantinthevehiclegroup,whilewasnotdifferent

fromthatatT8intheALG8810group.Comparedwiththevehiclegroup,ALG8810treatmentreG

duceduterineexpressionofVEGFandGlut1atT8(P<0.001),aswellastheexpressionofCXG

CL1andTNFGαatT24(P<0.01).ThenumberofbrancheswassignificantlydecreasedafterHUG

VECsweresupplemented withconditioned mediumfrom shGPGF2αGtransfectedepithelialcells

underhypoxia(P<0.01).Conclusion HypoxiaandPGF2αplayimportantrolesinphysiological

endometrialrepair,andpromotingPGF2αproductionmayhavepotentialtherapeuticvalueinthe

treatmentofmenstrualdisorders.

KEY WORDS:prostaglandinF2α;menstruation;endometrium;hypoxia;animalexperiment;

mice

以出血时间延长、出血过多和痛经为特征的月

经失调严重影响女性的健康和生活质量[1].在女性

生殖生理学中,子宫内膜的破裂对月经、流产和分娩

至关重要.月经停止需要子宫内膜螺旋小动脉的血

管收缩,然后修复受损的脉管系统,并使剩余裸露的

基底子宫内膜重新上皮[2].这种独特的、无疤痕的

修复过程对于保持生育能力和限制月经失血是必不

可少的.然而,目前关于子宫内膜修复的机制和调

节尚不清楚.前列腺素是众所周知的女性生殖道内

各种信号通路的调节剂,其在卵巢功能、胚胎植入和

月经中的作用已得到了很好的描述[3].有研究[3]表

明,月经过多和原发性痛经与子宫内前列腺素 F2α

(PGF2α)浓度失衡有关.痛经时,增加的 PGF2α水

平使子宫肌纤维的敏感性提升,导致子宫肌层强烈

收缩,血流受损[4].此外,PGF2α还是一种有效的

血管收缩剂,可直接作用于平滑肌纤维,导致螺旋小

动脉收缩,出现子宫内膜功能层的缺氧.低氧环境

抑制了缺氧诱导因子α亚基的降解,使其更多地与

缺氧反应元件结合,又反过来刺激了 PGF2α基因的

转录[5].然而,缺氧和 PGF2α在子宫内膜功能中的

作用仍未确定.因此,本研究使用小鼠月经样模型

探讨了缺氧和 PGF2α在月经过程中的作用,并发现

缺氧可以促进月经子宫内膜中的 PGF2α,从而能够

及时修复裸露的子宫内膜表面.

1 材料与方法

1.1 小鼠月经样模型建立及实验

8~10周龄的雌性 C57BL/6J小鼠购自北京维

通利华 公 司 (生 产 许 可 证 号 为:SCXK(京)2016G

0011),饲养在25℃无病原体的房间中,可以自由摄

取食物和水.研究经深圳市龙岗区第二人民医院伦

理委员会审查通过(编号:伦审202107G031).

参照有关文献[6]建立小鼠月经样模型:第1天

对雌鼠双侧卵巢进行切除,以消除内源性类固醇.

第7—9天,于早上9:30时给小鼠皮下注射100ng

βG雌二醇(E2,美国 AlfaAesar公司).3d后(第13

天),在小鼠皮下放置黄体酮(P4)植入物(含 有 约

15mgP4 粉 末,美 国 SigmaGAldrich 公 司).在 第

13—15天,于 早 上 9:30 时 给 小 鼠 皮 下 注 射 5ng

E2.在第15天,向小鼠宫颈内注射20μL 花生油

诱导子宫角蜕膜化.在蜕膜化后4d(第19天)通过

移除 P4植入物诱导 P4戒断.

小鼠月经样模型建立完成后,进行以下实验.

1)在 P4植入物移除时(T0,n=5),移除后8h

(T8,n=5)和24h(T24,n=5)通过颈椎脱位处死

小鼠,并收集子宫.使用免疫组织化学方法观察哌

莫硝唑和 PGF2α蛋白染色的定位.

2)钴可以降低血红蛋白的携氧能力,是一种常

用的缺氧类似反应诱导物质.参照有关文献[7]方法

对小 鼠 使 用 CoCl2 处 理. 将 小 鼠 分 为 2 组:无

CoCl2 给药组(CoCl2 - 组,n=5)和 CoCl2 给药组

(CoCl2 + 组,n=5).CoCl2 + 组 的 给 药 剂 量 为

50mg?kg

-1,在0、3和9h时通过腹腔注射给药

3次,而 CoCl2-组注射生理盐水,在24h收集小鼠

子宫.通过 免 疫 组 织 化 学 方 法 观 察 哌 莫 硝 唑 和

PGF2α蛋白表达.

3)将 PGF2α 受 体 抑 制 剂 ALG8810(美 国

APExBIO 公 司 )溶 解 在 DMSO (美 国 SigmaG

Aldrich公司)中并用花生油稀释.在 P4植入物移

除前1d,给予 ALG8810组(n=15)皮下注射100μL

ALG8810(剂量为10mg?kg

-1).同时给予溶剂对

照组(n=15)小鼠注射等量的DMSO 和花生油的混

合物.在 P4植入物移除时(T0,n=5),移除后8h

(T8,n=5)和24h(T24,n=5)通过颈椎脱位处死

小鼠,并收集子宫,进行组织学和 PCR分析.

16 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第24页

1.2 组织学方法

对小鼠 子 宫 切 片 (5μm)进 行 苏 木 精 和 伊 红

(H&E)染色,并由 2 名研究者分别对子宫内膜破

裂/修复阶段进行分级.分级标准如下:1级为蜕膜

组织,基质区室扩张,蜕膜细胞存在,腺体推向子宫

肌层;2级为早期破裂,蜕膜细胞之间的结构完整性

有所丧失,大多数蜕膜仍然完好;3级为完全破裂,

蜕膜区组织完全破坏,没有完整的蜕膜组织,子宫内

膜从子宫肌层脱落;4 级为早期修复,再上皮化开

始,从子宫肌层分离坏死组织;5级为完全修复,基

质已修复,完全再上皮化,有少量管腔碎片.

对小鼠子宫切片进行免疫组织化学染色,采用

Ly6G 抗 体 (稀 释 比 1?1000,英 国 BioLegend 公

司).在移除P4植入物前1.5h,小鼠腹腔注射溴脱

氧尿苷(BrdU,100μL,美国SigmaGAldrich公司)和

哌莫 硝 唑 (缺 氧 探 针,60 mg?kg

-1,美 国 HyG

poxyprobe公司)以标记增殖和缺氧细胞.

1.3 定量实时PCR

使用 RNeasyMiniKit(英国 Qiagen公司)从小

鼠子宫组织中提取总 RNA,并使用 SuperscriptViG

locDNA 合 成 试 剂 盒 (美 国 LifeTechnologies公

司)对 RNA 样 品 进 行 逆 转 录. 使 用 ABIPrism

7900系 统 在 标 准 条 件 下 通 过 Invitrogen2×ExG

pressSupermix(美国 LifeTechnologies公司)进行

实时 PCR 反应,以 GAPDH 作为内参基因用于标

准化.以2-ΔΔCt法确定 mRNAs的相对表达水平.

用 于 实 时 PCR 的 引 物 序 列 为 VEGFGF:5′GTTA

AACGAACGTACTTGCAGATGG3′;VEGFGR:5′GA

GAGGTCTGGTTCCCGAAAG3′.Glut1GF:5′GGG

ACCCTGCACCTCATTGG3′;Glut1GR:5′GGCCAC

GATGCTCAGATAGGG3′.CXCL1GF:5′GACTCC

AACACAGCACCATGAG3′,CXCL1GR:5′GTGGTC

TGCAGGCACTGACG3′.PGF2αGF:5′GTTTTTCA

AGCAGTAGGAATTGGAG3′;PGF2αGR:5′GGTGA

TGTAGTAGCTGCATGATCGG3′.TNFαGF:5′GC

TGTAGCCCACGTCGTAGCG3′;TNFαGR:5′GTTG

AGATCCATGCCGTTGG3′.GAPDHGF:5′GGAAG

GTCGGAGTCAACGGATTG3′;GAPDHGR:5′GAT

GGGTGGAATCATATTGGAAG3′.

1.4 内皮细胞分支测定

使用慢病毒ShRNA 构建体(shGPGF2α)在IshG

ikawa子 宫 内 膜 细 胞 (英 国 Culturecollections公

司)中沉默 PGF2α表达.将未转染的细胞(NC)和

用shGPGF2α或shGNC(阴性对照)转染的细胞中的

培养基替换为无血清 DMEM 培养基,并置于缺氧

条件(0.5% O2)中孵育8h,收获条件培养基并进行

内皮细胞分支测定.

在48孔板每孔中加入100μL Matrigel(美国

BDBiosciences 公 司 ),将 人 脐 带 血 管 内 皮 细 胞

(HUVEC,德国 PromoCell公司)以2×104 的密度

接种 在 含 有 GA1000 和 抗 坏 血 酸 SingleQuots的

EBMG2培养基(200μL,美国 Lonza公司)中.然后

将来自正常氧条件下的Ishikawa子宫内膜上皮细

胞和缺氧条件下未转染的Ishikawa子宫内膜上皮

细胞、shGPGF2α 转 染 细 胞、shGNC 转 染 细 胞、shG

PGF2α转染细胞+300ng?mL-1rhVEGF的条件

培养基加入 HUVEC中(每孔100μL).24h后,在

Axiovert倒置显微镜下观察每个培养孔相同位置

的内皮细胞分支情况.

1.5 统计学方法

使用 GraphPadPrism8.0软件进行数据分析.

采用Bonferroni’s/Tukey’s多重比较检验的双向方

差分析比较具有2个变量的数据集;采用 Tukey’s多

重比较检验的配对单向方差分析比较各组内皮细胞

分支点差异.以P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 小鼠月经样模型中缺氧与PGF2α表达的关系

在月经出血之前(T0),哌莫硝唑染色局限于管

腔上皮细胞,少量 PGF2α染色主要存在于蜕膜化区

的细胞中.在模拟月经期间(T8),整个蜕膜化区以

及坏死区的外缘均出现哌莫硝唑染色,PGF2α的定

位与哌莫硝唑基本一致,其在管腔上皮和上皮下蜕

膜基质细胞中表达增加.子宫内膜修复时(T24),

哌莫硝唑染色大大减少,仅在坏死区边缘和表面上

皮可见,并且 PGF2α的表达显著减弱,其定位限于

坏死区的外缘,见图1A.半定量分析表明,T8时哌

莫硝 唑 和 PGF2α 染 色 百 分 比 较 T0 时 显 著 增 加

(P<0.05),并且 T24时哌莫硝唑和 PGF2α染色百

分比较 T8时显著减少(P<0.05),见图1B—C.

2.2 缺氧增加子宫内膜PGF2α表达

采用 CoCl2 在小鼠中诱导局部缺氧,通过哌莫

硝唑 染 色 表 征 缺 氧 诱 导 的 效 率. 结 果 显 示,与

CoCl2-组相比,CoCl2+组哌莫硝唑和 PGF2α的染

色区域显著增加,见图2A.半定量分析显示,CoCl2

+组哌莫硝唑和 PGF2α染色细胞百分比显著高于

CoCl2-组(P<0.01或P<0.001),图2B—C.

田聪贵等:前列腺素 F2α在小鼠月经发生过程中的作用机制 17

第25页

唑 PGF2α

T0 T8 T24

A

50

40

30

20

10

0 哌

域/%

T0 T8 T24

##

***

B

60

40

20

0

PGF2α染

域/%

T0 T8 T24

#

***

C

A:月经期生理性缺氧和PGF2α表达随经期时间的变化.DZ:蜕膜区,LE:管腔上皮,比例尺:400μm;B—C:哌莫硝

唑和 PGF2α染色细胞百分比的半定量分析.∗∗∗P<0.001与 T0时比较,#P<0.05,##P<0.01与 T8时比较.

图1 小鼠月经样模型中缺氧与 PGF2α表达的关系

唑 PGF2α

CoCl2

- CoCl2+ 50

40

30

20

10

0 哌

域/%

***

CoCl2

- CoCl2+

60

40

20

0

PGF2α染

域/%

**

CoCl2

- CoCl2+ A

B C

A:CoCl2 处理24h后,小鼠子宫内膜哌莫硝唑和 PGF2α免疫组织化学染色.DZ:蜕膜区,LE:管腔上皮,比例

尺:400μm;B—C:CoCl2 处理24h后,哌莫硝唑和 PGF2α染色细胞百分比的半定量分析.∗∗P<0.01,∗∗∗P<

0.001与 CoCl2-组比较.

图2 缺氧增加子宫内膜 PGF2α表达

2.3 PGF2α受体抑制延迟子宫内膜修复

在出血时(T8),溶剂对照组和 ALG8810组子宫

内膜均表现出蜕膜化或破裂的特征(图3A).与溶

剂对照组相比,ALG8810组的分解阶段出现得更早

(P<0.05).T24时,溶剂对照组子宫内膜修复明

显,而 ALG8810组与 T8 时相比几乎没有差异(图

3B).使用qPCR 在 T0、T8和 T24时检测 PGF2α

的下游 靶 标 (VEGF、Glut1)和 炎 症 介 质 (CXCL1、

TNFGα)的表达水平,结果显示,与溶剂对照组相比,

ALG8810 组 小 鼠 的 子 宫 VEGF mRNA 和 Glut1

mRNA 在 T8时显著降低(P<0.001),并且CXCL1

mRNA 和 TNFGαmRNA 在 T24时显著降低(P<

0.01),见图3C—F.T24时,Ly6G 染色显示溶剂对

照组子宫组织中浸润的中性粒细胞较 ALG8810组

显著增加(P<0.001),见图3G—H.BrdU 掺入的

免疫组织化学染色显示,溶剂对照组管腔上皮强烈

染色,表明脱落的子宫内膜表面再上皮化程度较高,

相比之下,ALG8810组子宫内膜中 BrdU 染色水平

显著降低(P<0.001),见图3I—J.

修/复

比/%

A

Vehicle AL-8810

120

100

80

60

40

20

0

T8

* 3 级

2 级

1 级

B 各

修/复

比/%

Vehicle AL-8810

120

100

80

60

40

20

0

T24

* 5 级

4 级

3 级

2 级

1 级

VEGF m

R

N

A

C

150

100

50

0

Vehicle AL-8810

VEGF

***

T0 T8 T24

CXCL1 m

R

N

A

F

6

4

2

0

Vehicle AL-8810

CXCL1

**

T0 T8 T24

D

Glut-1 m

R

N

A

80

60

40

20

0

Vehicle AL-8810

***

Glut-1

T0 T8 T24

E TNF-α m

R

N

A

40

30

20

10

0

TNF-α

Vehicle AL-8810

T0 T8 T24

**

A—B:T8和 T24时,2组子宫内膜组织学分解和修复分级评分;C—F:T0、T8和 T24时,2组小鼠子宫 PGF2α的

下游靶标(VEGF、Glut1)和炎症介质(CXCL1、TNFGα)的 mRNA 表达水平.

图3 PGF2α在月经期的药理学抑制延迟子宫内膜修复

18 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第26页

H

Vehicle AL-8810

***

Ly6G

域/%60

40

20

0

Vehicle AL-8810

T24

G

J

T8 T24

BrdU

域/%

40

30

20

10

0

Vehicle AL-8810

*** ***

I

Vehicle AL-8810

T8

T24

G—H:T24时,2组子宫内膜组织中性粒细胞染色和定量分析,比例尺=100μm;I—J:T8和 T24时,2组子宫组

织中BrdU 染色和定量分析,比例尺=100μm.M:子宫肌层,DM:蜕膜肿块,E:子宫内膜,箭头指示活跃增殖的区域.

∗P<0.05,∗∗P<0.01,∗∗∗P<0.001与溶剂对照组比较.

图3(续)

2.4 人子宫内膜上皮细胞分泌 PGF2α 影响 HUG

VEC分支

对缺氧条件下培养的未转染的人子宫内膜上皮

细胞(NC)和用shGPGF2α或shGNC 转染的人子宫

内膜上皮细胞进行 PGF2α表达水平检测,确认了

shGPGF2α转染细胞中 PGF2α表达特异性敲低(图

4A). 收 集 上 述 细 胞 的 条 件 培 养 基 并 用 于 处 理

HUVEC,观察其 HUVEC 对分支形成的影响.结

果显示,与经常规孵育 NC条件培养基处理的 HUG

VEC相比,经缺氧条件下培养的 NC细胞条件培养

基的 HUVEC 分支数显著增加(P<0.01).然而,

经缺氧条件下培养的shGPGF2α转染细胞条件培养

基处理的 HUVEC细胞分支数目则显著降低(P<

0.01),但在培养体系中添加rhVEGF 可恢复 HUG

VEC分支数目,见图4B—C.

缺氧+sh-PGF2α

缺氧+sh-PGF2α+

VEGF

NC 缺氧+NC 缺氧+sh-NC

C

NC

sh-NC

sh-PGF2α

缺氧处理

500

400

300

200

100

0

&

##

** **

NC

sh-PGF2α+VEGF

B

4

3

2

1

0

PGF2α相

NC sh-NC sh-PGF2α

缺氧处理

A

***

A:shGPGF2α转染特异性 沉 默 子 宫 内 膜 上 皮 细 胞 中 的 PGF2α表 达,∗ ∗ ∗P <0.001 与 shGNC 组 比 较;

B—C:HUVEC经各组子宫内膜上皮细胞条件培养基处理24h后的分支数目与定量分析,∗∗P<0.01与常规

氧 NC比较,##P<0.01与缺氧+shGNC组比较,&P<0.05与缺氧+shGPGF2α+VEGF组比较.

图4 人子宫内膜上皮细胞分泌 PGF2α影响 HUVEC分支

田聪贵等:前列腺素 F2α在小鼠月经发生过程中的作用机制 19

第27页

3 讨论

目前,国内外对月经机制的研究较为有限,其中

缺乏模式动物模型是制约因素之一[8G9].为了弥补

这一不足,本研究使用卵巢切除的小鼠,依次用 E2

和 P4处理,以模拟女性生理周期的增殖和分泌阶

段.子宫内膜的蜕膜化是活跃月经所必需的,在女

性分泌期自发发生,本研究模型通过宫颈注射花生

油诱导子宫角蜕膜反应,随后停用 P4引发8h后的

月经样出血,24h后子宫内膜开始再上皮化和间质

修复.在模拟月经的小鼠模型中,本研究发现活动

性出血期间,需要修复的组织区域存在缺氧现象,并

且在缺氧区域观察到 PGF2α的表达在子宫内膜破

裂期间激活,提示经期子宫内膜缺氧可能通过激活

PGF2α诱导子宫内膜修复.

前列腺素是女性生殖系统中调控各种信号通路

的调节剂,其在卵巢功能、胚胎植入和月经中的作用

已经得到详细描述[10G11].有研究[12]数据表明,前列

腺素 E2受体的激活可以上调多种子宫内膜生长因

子的表达.PGF2α是子宫内膜中主要的前列腺素,

其通过激活 PGF2α受体发挥生物学作用[13],例如

成骨细胞的增殖调节[14].PGF2α可通过收缩血管

和减少血流对组织的修复过程发挥影响[3],PGF2α

的合成和自分泌作用还可以增加肾上腺髓质素的水

平,在月经 后 子 宫 内 膜 修 复 过 程 中 发 挥 着 关 键 作

用[15].此外,之前研究[16]揭示月经期间抑制裸露

的子宫内膜表面的新生血管形成可使上皮化延迟,

影响内膜修复.本研究采用 ALG8810阻碍 PGF2α

与其受体的结合,导致月经样模型小鼠子宫内膜组

织中 VEGFmRNA 水平降低,表明 PGF2α是缺氧

诱导的小鼠子宫内膜上皮细胞 VEGF 增加所必需

的.已有研究[14]证明,PGF2α在小鼠模型的月经期

间直接结合 VEGF启动子.通过体外实验,本研究

发现沉默 PGF2α的人类子宫内膜上皮细胞的条件

培养基无法有效提升血管内皮细胞分支数目,进一

步支持 PGF2α在人类月经期间对血管生长的调节

作用.

本研 究 数 据 证 明 子 宫 内 膜 缺 氧 环 境 可 调 节

PGF2α的表达,以及时修复经期裸露的子宫内膜表

面,并且 PGF2α可以提高受损血管系统的修复效率

和/或驱动血管生成以优化后续月经周期中的血管

功能.另外,本研究实验发现 ALG8810抑制 PGF2α

与其受体的结合后,月经出血期间子宫内膜中性粒

细胞浸润显著减少.有研究[17G18]表明,中性粒细胞

耗竭后子宫内膜修复减慢,正常月经及组织修复过

程需要 中 性 粒 细 胞 的 参 与.同 时,实 验 数 据 显 示

ALG8810处理组炎症介质 CXCL1、TNFGα mRNA

水平在 T24时较溶剂对照组显著降低.这些数据

表明 PGF2α可能参与调节子宫内膜脱落引起的炎

症反应.由于月经时子宫内膜局部的环境表现出许

多急性炎症反应的特征,缺氧对 PGF2α生成的贡献

仍需要深入研究.

综上所述,本研究结果支持缺氧和 PGF2α在生

理性子 宫 内 膜 修 复 中 的 重 要 作 用,并 表 明 促 进

PGF2α生成可作为月经失调的潜在治疗靶点.

参考文献:

[1] 郭玉峰,罗新,张颖.功能失调性子宫出血不同治疗时间疗效观

察研究[J].中国实用妇科与产科杂志,2020,36(2):182G184.

[2] 左娜,王秀霞.月经周期中子宫血流参数变化对体外受精G胚胎

移植妊娠结局的预测及评价[J].中国实用妇科与产 科 杂 志,

2019,35(5):597G600.

[3] GAOL,GAORF,MAO W,etal.PTGFRactivationpromotes

theexpressionofPTGSG2andgrowthfactorsviaactivationof

thePKCsignalingpathwayinbovineendometrialepithelial

cells[J].Anim ReprodSci,2018,199:30G39.

[4] ROBELDOT,CANZIEF,DEANDRADEPM,etal.Effectof

Tahitilime(Citruslatifolia)juiceontheproductionofthe

PGF2α/PGE2 and proGinflammatory cytokinesinvolved in

menstruation[J].SciRep,2020,10(1):7063.

[5] LIUT,SHIFL,YINGY,etal.Mousemodelofmenstruation:

anindispensabletooltoinvestigatethe mechanismsofmenG

struationandgynaecologicaldiseases(Review)[J].Mol Med

Rep,2020,22(6):4463G4474.

[6] WANGSF,CHEN X H,HEB,etal.Acuterestraintstress

triggersprogesteronewithdrawalandendometrialbreakdown

andshedding through corticosterone stimulationin mouse

menstrualGlikemodel[J].Reproduction,2019,157(2):149G161.

[7] SHIG G,WANG G,LUSZ,etal.PDGL1isrequiredforhuG

manendometrialregenerativecellsGassociatedattenuationof

experimentalcolitisinmice[J].AmJTranslRes,2019,11(8):

4696G4712.

[8] 陶小玲,陈雪君,赵军招,等.功能失调性子宫出血中医辨证规

律及雌激素水平分析[J].中华中医药学刊,2020,38(2):241G

243.

[9] COUDYZERP,LEMOINEP,JORDANBF,etal.Hypoxiais

notrequiredforhumanendometrialbreakdownorrepairina

xenograftmodelofmenstruation[J].FASEBJ,2013,27(9):

3711G3719.

[10] NIRINGIYUMUKIZAJD,CAIHC,XIANG WP.Prostaglandin

E2involvementinmammalianfemalefertility:ovulation,fertilizaG

tion,embryodevelopmentandearlyimplantation[J].ReprodBiG

olEndocrinol,2018,16(1):43.

(下转第26页)

20 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第28页

收稿日期:2022G05G09

基金项目:江苏省卫健委医学科研项目(20200374)

作者简介:孔繁君(1992—),女,本科,主治医师,主要从事普通外科学的研究.

通信作者:张弘炜,主任医师,EGmail:hlun9766@163.com.

RBM43调控SlugmRNA抑制

肝癌细胞转移的机制研究

孔繁君,殷淑芳,张弘炜

(江苏省肿瘤医院普外科,南京 210000)

摘要:目的 探讨 RBM43通过调控SlugmRNA 的稳定性抑制肝癌细胞转移的作用.方法 使用于江苏省肿瘤

医院接受肝癌根治性切除术的88例患者的病理组织样品及肝细胞癌(HCC)细胞系 HuhG7作为实验材料.通过免

疫组织化学和蛋白免疫印迹确定 RBM43在 HCC 组织中的表达情况.分别用 RBM43表达载体和空白对照载体

质粒转染 HuhG7细胞,获得过表达 RBM43组和对照组细胞.采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白免疫印迹

检测2组细胞中 RBM43和SlugmRNA 及蛋白的表达情况,通过CCK8、集落形成和伤口愈合实验、Transwell侵袭

实验评估2组细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结果 RBM43在肿瘤组织中IHC评分和肿瘤组 RBM43蛋白的相对

表达水平均低于癌旁组织(P<0.05);过表达 RBM43组细胞的 RBM43和 SlugmRNA 和蛋白的相对表达水平均

显著低于对照组(P<0.05),且过表达 RBM43组细胞的在传代接种后3、5和7d时的细胞活力均显著低于同时期

的对照组(P<0.001);过表达 RBM43组细胞的克隆形成能力,划痕恢复速度和 Transwell侵袭能力均显著低于对

照组(均P<0.05).结论 RBM43通过调控Slug发挥抑制 HCC细胞增殖和迁移作用,可能成为 HCC治疗的有

效治疗靶点.

关键词:RBM43;Slug;肝癌;转移

中图分类号:R735.7 文献标志码:A 文章编号:2095G4727(2023)06-0021-06

DOI:10.13764/j.cnki.ncdm.2023.06.004

RBM43InhibitsLiverCancerCellMetastasis

byRegulatingSlugmRNA

KONGFanGjun,YINShuGfang,ZHANGHongGwei

(DepartmentofGeneralSurgery,JiangsuCancerHospital,Nanjing210000,China)

ABSTRACT:Objective ToexploretheroleofRBM43ininhibitinghepatocellularcarcinoma

(HCC)metastasisbyregulatingthestabilityofSlugmRNA.Methods PathologicaltissuesamG

plesfrom88patientswhounderwentradicalresectionforHCCatJiangsuCancerHospitaland

HuhG7celllinewereusedastheexperimentalmaterials.TheexpressionofRBM43inHCCtissues

wasdeterminedbyimmunohistochemistryand Westernblotting.HuhG7cells weretransfected

withRBM43expressionvectorsandemptyplasmidstoestablishRBM43overexpressiongroup

andcontrolgroup,respectively.TheexpressionofRBM43andSlugmRNAandproteinin HCC

cellswasdetectedbyqRTGPCRand Westernblotting,respectively.Theproliferation,migration,

colonyformationandinvasioncapacitiesweremeasuredbyCCK8,colonyformations,woundhealG

ingandTranswellassays,respectively.Results TheIHCscoreandproteinexpressionofRBM43

intumortissueswerelowerthanthoseinparaGcancertissues(P<0.05).Theexpressionlevelsof

RBM43andSlugmRNAandproteininRBM43overexpressiongroupwerelowerthanthosein

南昌大学学报(医学版)2023年第63卷第6期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2023,Vol.63No.6 21

第29页

thecontrolgroup(P<0.05),andthecellviabilityinRBM43overexpressiongroupwaslowerthan

thatinthecontrolgroupat3,5and7daysafterinoculation(P<0.001).Inaddition,thecolony

formationcapability,scratchwoundhealingspeedandinvasionabilityinRBM43overexpression

groupwerelowerthanthoseinthecontrolgroup(P<0.05).Conclusion RBM43inhibitsHCC

cellproliferationandmigrationbyregulatingSlugmRNA.Therefore,itmaybeaneffectivetarget

forHCCtreatment.

KEY WORDS:RBM43;Slug;livercancer;metastasis

全球每年有超过50万例肝细胞癌(HCC)新发

病例,肝内和肝外转移通常是 HCC 进展中的致命

事件[1].HCC的主要病因是肝硬化,其临床特征在

于诊断延迟、发病机制复杂、血管浸润、易发转移和

多重耐药性[2].而癌症转移的一个关键因素是肿瘤

细胞的运动性和侵袭行为增强[3].

RNA 结合蛋白(RBP)通常通过一个或多个球

状 RNA 结合结构域(RBD)结合 RNA 并改变其生

物学命运.RBP 失调与人类肿瘤发生和进展有因

果关系[4].RNA 结合基序蛋白 43(RBM43)属 于

RNA 结合基序蛋白(RBM)家族,包含两个保守的

RNA 结合基序 RNP1和 RNP2,是一种肿瘤抑制因

子.有研 究[5]发 现 RBM43 与 HCC 的 风 险 相 关.

肿瘤细胞的运动性,侵袭和转移能力与上皮G间充质

转变(EMT)广泛相关,EMT 在许多正常生理过程

中也起着关键作用,例如胚胎发生,伤口修复和组织

重塑[6].Slug是 EMT 过程中的重要转录因子,可

在抑制上皮表型相关基因表达的同时诱导间充质表

型相关基因的表达[7].本研究主要目的在于探索

RBM43通过调节SlugmRNA 的稳定性影响 HCC

转移的生物学机制.

1 材料与方法

1.1 标本及来源

选取2020年10月至2022年10月于江苏省肿

瘤医院接受肝癌根治性切除术的88例 HCC患者,

收集手术中切除的组织,于显微镜下分离肿瘤组织

和癌旁组织,于-80 ℃冰箱保存.入选患者均排除

远处转移,且术前未接受化、放疗.本研究获医院医

学伦理委员会批准.

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养

HCC细胞系 HuhG7(购自日本癌症研究库)培

养于高糖 DMEM 培养基(购自美国Invitrogen 公

司),并添加10%胎牛血清(购自美国Invitrogen公

司),100U?mL-1青霉素和100μg?mL-1链霉素

(购 自 美 国 SigmaGAldrich 公 司 ). 培 养 条 件 为

37 ℃,5% CO2,饱和湿度培养箱.

1.2.2 细胞转染

分别用带有 Flag标记的 RBM43 表达载体和

带有pBabe的对照载体转染 HuhG7细胞,用嘌呤霉

素处理15d,获得 RMB43过表达组和对照组细胞.

提取2组细胞总蛋白样本,使用抗 Flag抗体通过蛋

白质免疫印迹法验证转染效果.

1.2.3 免疫组化

手术中取出的患者病理组织样品立即用4%多

聚甲醛溶液固定,后进行标准化石蜡包埋切片,制片

厚度4~7μm.组织切片放入0.01 M 柠檬酸盐缓

冲液(pH6.0),在微波炉中加热10min进行抗原修

复.冷却至室温后,用3% H2O2 处理10min以灭

活内源性过氧化物酶.将切片与 RBM43一抗和标

记二抗共孵育过夜,然后用二氨基联苯胺(DAB)进

行显色并用苏木精复染.由病理医生用半定量法对

每个病例的染色组织进行评分,评估异质阳性分布

和染色强度的不同,评分0—3分,0分表示无阳性

染色,3分表示阳性染色最强.

1.2.4 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)

使用 TRIzol试剂(购自美国Invitrogen公司)

提取细胞总 RNA,并用 DNase处理.使用 SuperG

ScriptⅢ逆转录酶(购自美国Invitrogen公司)进行

逆转录,获取cDNA 模板.将1μLcDNA 模板、目

标序列特异性引物和SYBRGreenqPCR 预混液混

合,反应条件如下:95 ℃下变性30s,之后进入40

个变性扩增循环,95 ℃ 5s,60 ℃ 34s.以βGactin

为内参,用2-ΔΔCt法计算相对表达水平.每个样品

进行3次重复.

1.2.5 蛋白质免疫印迹

将2组细胞或病理组织单细胞悬浮液在细胞裂

解缓冲液中进行匀浆,并在4 ℃下以14000g离心

15min,用 BCA 法测定上清液的蛋白质浓度.蛋白

质电泳后,转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,随后

与 RBM43、GAPDH 和Slug一抗共同孵育过夜,漂

洗后孵育荧光素偶联二抗.后使用 Odyssey荧光

扫描仪进行检测,用ImageJ软件测量条带灰度值.

22 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第30页

1.2.6 细胞增殖检测

用 CCK8法检测细胞增殖.分别 2 组细胞以

5×103 个?孔-1的密度接种到96孔板中.分别在

培养细胞 1、3、5 和 7d时加入 CCKG8 工作液,在

37 ℃下孵育2~4h.测定各孔在460nm 处的 OD

值.

1.2.7 克隆形成实验

分别将2组细胞以400个?孔-1的密度接种到

6孔板中,并在常规培养基中培养24h.吸除培养

基,用 PBS 清 洗 细 胞 3 次,用 4% 多 聚 甲 醛 固 定

15min,后用0.1%结晶紫溶液染色15 min.在光

学显微镜下统计各孔细胞克隆数目(每个集落>50

个细胞).2组细胞各设置3个重复孔.

1.2.8 细胞划痕实验

将2组细胞接种到 6 孔板中,并在 5% CO2,

37 ℃条件下培养24h.用200μL移液器吸头在每

个孔中划痕,保持吸头与孔底垂直.用 PBS洗涤细

胞2次,添加新鲜培养基.继续培养0、24和48h

后在倒置显微镜下观察划痕愈合情况.

1.2.9 Transwell侵袭实验

选用膜孔径8μm 的 BioCoat基质胶侵袭小室

(购自美国 BDBiosciences公司)进行中 Transwell

细胞侵 袭 实 验.分 别 将 2 组 细 胞 以 2×104 个 ?

孔-1的密度接种至小室内.将含有15%胎牛血清

的培养基加入下腔室.孵育48h后,用棉签除去小

室内表面的非侵袭细胞,用100%甲醇固定小室,进

行吉姆萨染色.在显微镜下观察统计侵袭细胞数

目.

1.3 统计学方法

用SPSS21.0软件对实验数据进行分析.计量

资料以x±s 表示,多组间比较采用单因素方差分

析.以P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 RBM43在人 HCC组织中表达水平降低

免疫组织化学染色结果表明,RBM43染色在正

常细胞膜和细胞质中观察到,RBM43在肿瘤组织中

IHC评分为(9.00±4.21)分,与 HCC的癌旁组织的

(19.83±4.26)分相比明显下调(P<0.05).蛋白免

疫印迹检测发现,肿瘤组 RBM43蛋白的相对表达

水平为(2.06±0.68),与癌旁组织的(3.78±0.60)相

比亦明显下调(P<0.05).见图1.

癌旁组织 肿瘤

A 癌旁组织 肿瘤

30

20

10

0 R

B

M43免

分/

*

B

癌旁组织 肿瘤

RBM43

β-actin

C

癌旁组织 肿瘤

5

4

3

2

1

0

R

B

M43/β-actin

*

D

A—B:RBM43的免疫组化评分;C—D:免疫印迹检测 RBM43的表达.∗P<0.05,与癌旁组织比较.

图1 RBM43在人类 HCC中表达水平降低

2.2 RBM43 过 表 达 抑 制 HCC 细 胞 增 殖 和 Slug

表达

通过蛋白免疫印迹和qPCR 分析 RMB43过表

达组和对照组细胞中 RBM43的表达水平,结果发

现,过表达 RBM43组细胞的 RBM43 mRNA 和蛋

白的相对表达水平分别为(3.74±0.50)和(3.08±

1.26),显著高于对照组的(1.10±0.34)和(1.76±

0.71)(P<0.05).细胞计数试剂盒8(CCKG8)检测

结果显示,过表达 RBM43组细胞的在3、5和7d的

相对活力 分 别 为 (0.43±0.12)、(0.99±0.20)和

孔繁君等:RBM43调控SlugmRNA 抑制肝癌细胞转移的机制研究 23

第31页

(1.37±0.25),明显低于对应时间点的对照组细胞

活力[0.98±0.15)、(2.04±0.21)和(2.78±0.12)],

过表 达 RBM43 细 胞 的 生 长 受 到 显 著 抑 制 (P <

0.01).另外,过表达 RBM43组 Slug的 mRNA 和

蛋白的相对表达水平分别为(1.58±0.42)和(0.94±

0.61),亦显著低于对照组(P<0.05).见图2.

Slug

RBM43

β-actin

对照组 过表达

RBM43 组

B

C

5

4

3

2

1

0

RBM43/β-actin

对照组 过表达

RBM43 组

*

3

2

1

0

Slug/β-actin

对照组 过表达

RBM43 组

*

D

E

5

4

3

2

1

0

RBM43 m

R

N

A

对照组 过表达

RBM43 组

* 4

3

2

1

0

Slug m

R

N

A

对照组 过表达

RBM43 组

*

F

对照组

过表达 RBM43 组

3

2

1

0

O

D450 nm

**

**

**

1 3 5 7

A

时间/d

A:CCK8检测细胞增殖;B—D:蛋白免疫印迹检测 RBM43和 Slug的表达;E—F:qPCR

检测 RBM43和Slug的表达.∗P<0.05,∗∗P<0.01与对照组比较.

图2 RBM43对 HCC中SlugmRNA的影响

2.3 RBM43调控 SlugmRNA 影响肝癌细胞侵袭

能力

克隆形成实验结果显示,过表达 RBM43组细

胞形成的克隆数为(111.60±19.32)个,与对照组的

(506.20±63.86)个比较显著减少(P<0.05).细胞

划痕实 验 结 果 显 示,过 表 达 RBM43 组 细 胞 划 痕

48h后,缺损区域为(79.60±7.54)%,显著高于同时

期对 照 组 的 (40.00±4.18)% (P <0.05).此 外,

Transwell侵袭实验结果显示,过表达 RBM43组侵

袭细胞 的 数 量 为 (46.00±6.63)个,与 对 照 组 的

(94.20±5.81)个比较显著减少(P<0.05).见图3.

对照组

过表达 RBM43 组

A

B

个/

对照组 过表达

RBM43 组

600

400

200

0

*

A—B:集落形成试验分析 RBM43过表达对细胞生长的影响.

图3 RBM43调控SlugmRNA影响肝癌细胞侵袭能力

24 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第32页

D

合/%

对照组

过表达 RBM43 组

100

50

0

对照组

过表达 RBM43 组

对照组

过表达 RBM43 组

0 h

24 h

48 h

对照组 过表达 RBM43 组

0 h

24 h

48 h

C

F

个/ 120

80

40

0

对照组 过表达 RBM43 组

*

对照组 过表达 RBM43 组

E

C—D:伤口愈合测定检查 RBM43在调节细胞迁移能力中的作用;E—F:使用 Transwell侵袭测定法

检查了 RBM43对细胞侵袭能力.

图3(续)

3 讨论

HCC的发生发展是非常复杂的过程,与多种遗

传改变有关,涉及原癌基因的过表达和致癌基因的

异常沉默.尽管治疗方法不断取得进步,但高复发

率和转移率仍然影响着 HCC患者的预后[8].相关

研究显示 RBM43在人类肿瘤中表达显著下调,其

低表达水平与 HCC患者的预后不良相关[9].本研

究结果证明 HCC组织中 RBM43显著下调,而过表

达 RBM43抑制了 HCC细胞系的增殖及迁移.

RBPs是重要的转录后调节因子,在众多细胞

途径和生物过程中起着关键作用,其家族成员含有

1个以上 RBDs或 RBMs,因此 RBPs可以识别靶

mRNA 并调节其代谢和功能,包括剪接、翻译、定位

和稳定性[10].RBM38和 RBM24是目前研究较为

广泛的 RBPs,他 们 通 过 与 肿 瘤 抑 制 因 子 (TS)如

p53家族(即 p53,p63,p73)形成负反馈回路,在各

种人类癌症中发挥肿瘤抑制作用[11].此外,RBPs

家族成员 CELF1 在结直肠癌中过表达,通过靶向

调控 ETS2促进细胞迁移、侵袭和化学耐药性的产

生[12].RBM43包含2个 RNA 识别基序(RRMs),

RNP1和 RNP2

[13].有研究[14]表明 RBM43表达异

常是导致2型糖尿病、子宫内膜异位症、食管腺癌和

巴雷特食道的遗传因素.本研究结果发现,RBM43

表达在 HCC组织中下调.

有研究[15]发现,RBM43通过控制癌症相关基

因 mRNA 剪接来调控各种癌细胞的转移,还调节

BclGxL mRNA 剪接进而调控细胞凋亡,BclGxL 的

共表达部 分 逆 转 了 过 表 达 RBM43 介 导 的 肿 瘤 抑

制.此外,RBM4抑制致癌剪接因子SRSF1以降低

mTOR活 化 水 平. 研 究 结 果 发 现 HCC 患 者 的

RBM43表达降低,RBM43水平与其生存率呈正相

关[16].Slug是 EMT 过程中的重要蛋白,在 HCC

细胞中,Slug上调会使其迁移和侵袭能力增加[17].

有研究[6]表明 Slug可介导 EMT,导致肿瘤进展.

本研 究 结 果 发 现 过 表 达 RBM43 的 HCC 细 胞 中

Slug表达下降,且细胞增殖,迁移和侵袭能力均降

低.这表明 RBM43通过调控 SlugmRNA 抑制肝

癌细胞转移.

综上 所 述,RBM43 通 过 调 控 Slug 发 挥 抑 制

HCC细胞增殖和迁移作用,可能成为 HCC 治疗的

有效治疗靶点,值得后续深入研究.

参考文献:

[1] FORNERA,REIG M,BRUIXJ.Hepatocellularcarcinoma[J].

Lancet,2018,391(10127):1301G1314.

[2] JIAO Y,WU Y,DU D.Polydatininhibitscellproliferation,inG

vasionandmigration,andinducescellapoptosisinhepatocelluG

larcarcinoma[J].BrazJMedBiolRes,2018,51(4):e6867.

孔繁君等:RBM43调控SlugmRNA 抑制肝癌细胞转移的机制研究 25

第33页

[3] SONGFN,DUAN M,LIU LZ,etal.RANKL promotesmiG

grationandinvasionofhepatocellularcarcinomacellsviaNFG

κBGmediatedepithelialGmesenchymaltransition[J].PLoSOne,

2014,9(9):e108507.

[4] GERSTBERGER S,HAFNER M,TUSCHL T.Acensusof

humanRNAGbindingproteins[J].Nat Rev Genet,2014,15

(12):829G845.

[5] DUMESICPA,WILENSKYSE,BOSES,etal.RBM43links

adiposeinflammationandenergyexpenditurethroughtranslaG

tionalregulationofPGC1α[J/OL].bioRxiv,2023[2022G04G24].

https://doi.org/10.1101/2023.01.06.522985.

[6] SÁNCHEZTILLÓE,LIU Y Q,DEBARRIOSO,etal.EMTG

activatingtranscriptionfactorsincancer:beyond EMT and

tumorinvasiveness[J].CellMolLifeSci,2012,69(20):3429G

3456.

[7] ZHAOXL,SUNBC,SUND,etal.SlugpromoteshepatocelG

lularcancercellprogressionbyincreasingsox2andnanogexG

pression[J].OncolRep,2015,33(1):149G156.

[8] TANAKA S,SUGIMACHIK,MAEHARA SI,etal.OncoG

genicsignaltransductionandtherapeuticstrategyforhepatoG

cellularcarcinoma[J].Surgery,2002,131(1Suppl):S142GS147.

[9] FENGH,LIUJ,QIUYY,etal.RNAGbindingmotifprotein43

(RBM43)suppresses hepatocellular carcinoma progression

through modulation ofcyclin B1expression[J].Oncogene,

2020,39(33):5495G5506.

[10] LIY,LIULL,HUR,etal.ElevatedexpressionoftheRNAG

bindingmotifprotein43predictspoorprognosisinesophageal

squamouscellcarcinoma[J].IntJClinOncol,2021,26(10):

1847G1855.

[11] PERETTID,SMITH H L,VERITY N,etal.TrkBsignaling

regulatesthecoldGshockprotein RBM3GmediatedneuroproG

tection[J].LifeSciAlliance,2021,4(4):e202000884.

[12] ZHANGJ,JUNCHOS,CHEN XB.RNPC1,anRNAGbindG

ingproteinandatargetofthep53family,regulatesp63exG

pressionthroughmRNAstability[J].ProcNatlAcadSciUS

A,2010,107(21):9614G9619.

[13] DONGJ,LEVINE D M,BUAS M F,etal.InteractionsbeG

tweengeneticvariantsandenvironmentalfactorsaffectriskof

esophagealadenocarcinomaandBarrett’sesophagus[J].Clin

GastroenterolHepatol,2018,16(10):1598G1606.e4.

[14] WANG Y,CHEN D,QIAN H L,etal.Thesplicingfactor

RBM4controlsapoptosis,proliferation,andmigrationtosupG

presstumorprogression[J].CancerCell,2014,26(3):374G

389.

[15] CHENSL,YANGD,LIUZL,etal.CrucialgeneidentificaG

tionin carotid atherosclerosis based on peripheral blood

mononuclearcell(PBMC)databyweighted(gene)correlation

networkanalysis(WGCNA)[J].MedSci Monit,2020,26:

e921692.

[16] LIU Y H,YAN W Z,ZHOU D F,etal.LongnonGcoding

RNA HOXA11GASacceleratescellproliferationandepitheliG

alGmesenchymaltransition in hepatocellular carcinoma by

modulatingthe miRG506G3p/Slugaxis[J].IntJ Mol Med,

2020,46(5):1805G1815.

[17] ZHOUY,XUERF,WANGJL,etal.PuerarininhibitshepaG

tocellularcarcinomainvasionandmetastasisthroughmiRG21G

mediatedPTEN/AKT signalingtosuppresstheepithelialG

mesenchymaltransition[J].BrazJ Med BiolRes,2020,53

(4):e8882.

(责任编辑:李松旻)

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(上接第20页)

[11] KACZYNSKIP,BARYLA M,GORYSZEWSKA E,etal.

ProstaglandinF2αpromotesembryoimplantationanddevelG

opmentinthepig[J].Reproduction,2018,156(5):405G419.

[12] ZHANGSY,LIUB,MAO W,etal.Theeffectofprostaglandin

E2receptor(PTGER2)activationongrowthfactorexpression

andcellproliferationinbovineendometrialexplants[J].ProsG

taglandinsLeukotEssentFattyAcids,2017,122:16G23.

[13] 樊琼,韦玉娜,尹玲,等.大黄庶虫虫丸治疗子宫内膜异位症

盆腔疼痛气滞血瘀证的临床观察[J].中国实验方剂学杂志,

2019,25(12):121G126.

[14] KUROYANAGIG,SAKAIG,OTSUKA T,etal.HSP22

(HSPB8)positivelyregulatesPGF2αGinducedsynthesisof

interleukinG6andvascularendothelialgrowthfactorinosteoG

blasts[J].JOrthopSurgRes,2021,16(1):72.

[15] 周芳.前列腺素及其受体在月经发生中对子宫内膜崩解脱落

作用机制的研究[D].北京:北京协和医学院,2018.

[16] OUYANGXL,YOUS,ZHANGYL,etal.Transplantation

ofhumanamnionepithelialcellsimprovesendometrialreG

generationinratmodelofintrauterineadhesions[J].Stem

CellsDev,2020,29(20):1346G1362.

[17] ARMSTRONGG M,MAYBINJA,MURRAY A A,etal.

Endometrialapoptosis and neutrophilinfiltration during

menstruationexhibitsspatialandtemporaldynamicsthatare

recapitulatedina mouse model[J].SciRep,2017,7(1):

17416.

[18] COUSINSFL,KIRKWOODP M,SAUNDERSP T K,et

al.Evidenceforadynamicroleformononuclearphagocytes

duringendometrialrepairandremodelling[J].SciRep,2016,

6:36748.

(责任编辑:李松旻)

26 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第34页

收稿日期:2023G05G18

基金项目:国家自然科学基金(81860435)

作者简介:韩曲(1986—),男,硕士,主治医师,主要从事胃肠道肿瘤及疝与腹壁外科学的研究.

通信作者:徐维,副主任医师,副教授,EGmail:304260817@qq.com.

腹腔镜下腹股沟疝修补术中腹膜前放置

引流管减轻血清肿形成的 Meta分析

韩 曲1,曾 慧1,汪艮亮2,徐 维2

(1.丰城市人民医院普外一科,江西 丰城 331104;

2.南昌大学第二附属医院结直肠肿瘤诊疗中心,南昌 330006)

摘要:目的 系统评价腹腔镜下腹股沟疝修补术中腹膜前放置引流管的临床疗效.方法 检索 PubMed、EmG

base、CochraneLibrary、WebofScience、万方、中国生物医学文献服务系统、中国知网、维普等数据库,收集腹腔镜

下经腹膜前腹股沟疝修补术(TAPP)或完全腹膜外腹股沟疝修补术(TEP)中腹膜前放置引流管减少血清肿形成的

相关研究文献,检索时间为2000年9月至2022年9月,由2名研究人员严格按照纳入/排除标准独立完成文献筛

选、资料提取及质量评价等,采用 RevMan5.3软件进行 Meta分析.结果 共纳入9篇文献,1944例患者.Meta

分析显示:观察组(腹膜前放置引流管)术后血清肿形成率显著低于对照组(腹膜前未放置引流管)(P<0.00001,

I2=42%);TAPP(P<0.0001,I2=0%)或 TEP(P<0.00001,I2=0%)中观察组较对照组术后血清肿形成率均

更低.观察组手术时间较对照组更长(P<0.00001,I2=17%).2组术中出血量、术后24h及1周疼痛评分比较

差异均无统计学意义(P>0.05,I2=0%).结论 腹腔镜下腹股沟疝修补术中腹膜前放置引流管能有效降低患者

术后血清肿的形成率,且具有较好的安全性.

关键词:腹腔镜下完全腹膜外疝修补术;腹腔镜下经腹膜前疝修补术;引流;血清肿;Meta分析

中图分类号:R656.2+1 文献标志码:A 文章编号:2095G4727(2023)06-0027-06

DOI:10.13764/j.cnki.ncdm.2023.06.005

AnteriorPeritonealDrainageTubePlacementduring

LaparoscopicInguinalHerniaRepairReduces

SeromaFormation:aMetaGAnalysis

HANQu1,ZENGHui1,WANGGenGliang

2,XU Wei2

(1.DepartmentofGeneralSurgery,FengchengPeople’sHospital,Fengcheng331104,China;

2.ColorectalCancerTreatmentCenter,the2nd Affiliated Hospital,JiangxiMedicalCollege,

NanchangUniversity,Nanchang330006,China)

ABSTRACT:Objective Tosystematicallyevaluatetheclinicalefficacyofanteriorperitoneal

drainagetubeplacementinlaparoscopicinguinalherniarepair.Methods WesearchedPubMed,

Embase,CochraneLibrary,Wanfang,ChinaBiomedicalLiteratureServiceSystem,CNKI,VIPand

otherdatabasestocollecttherelevantresearchliteratureregardingtheclinicalefficaciesofanteriG

orperitonealdrainagetubeplacementduringlaparoscopictransperitonealinguinalherniarepair

(TAPP)ortotallyextraperitonealinguinalherniarepair(TEP)forreducingseromaformation

from September2000toSeptember2022.Tworesearchersindependentlycompletedliterature

screening,dataextractionandqualityevaluationinstrictaccordancewiththeinclusion/exclusion

南昌大学学报(医学版)2023年第63卷第6期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2023,Vol.63No.6 27

第35页

criteria.ThemetaGanalysiswasperformedusingRevMan5.3software.Results Atotalof9artiG

clesinvolving1944patientswereincluded.ThemetaGanalysisshowedthattheseromaformation

ratesafteroperation,duringTAPPandduringTEPintheobservationgroup(patientsreceived

preperitonealdrainagetubeplacement)weresignificantlylowerthanthatinthecontrolgroup

(patientsdidnotreceivepreperitonealdrainagetubeplacement)(P<0.00001,I2=42%,0% and

0%,respectively).Theoperationtimeintheobservationgroupwaslongerthanthatinthecontrol

group(P< 0.00001,I2=17%).TherewerenostatisticallysignificantdifferencesinintraoperaG

tivebloodlossand24Ghourand1Gweekpostoperativepainscoresbetweenthetwogroups(P>

0.05,I2=0%).Conclusion AnteriorperitonealdrainagetubeplacementduringlaparoscopicinG

guinalherniarepaircaneffectivelyandsafelyreducepostoperativeseromaformation.

KEY WORDS:totallylaparoscopicextraperitonealinguinalherniarepair;

laparoscopictransperitonealinguinalherniarepair;drainage;seroma;metaGanalysis

近年 来,腹 腔 镜 下 经 腹 膜 前 腹 股 沟 疝 修 补 术

(TAPP)或腹腔镜下完全腹膜外腹股 沟 疝 修 补 术

(TEP)已成为腹股沟疝手术的标准术式[1G3].该术

式具有侵入性小、恢复快和复发率低等优点,但术后

常见血清肿形成.血清肿是术后腹膜前间隙局部积

液或手术部位出现的半球形肿胀,常难与腹股沟疝

复发区分,体格检查和彩超有助于确诊血清肿.有

文献 报 道[4G6],血 清 肿 形 成 的 发 生 率 为 2.2% ~

64.0%.虽然大多数情况下血清肿形成发生在术后

早期,通常在术后第一周内,而且许多血清肿即使不

干预,3个月内也可自行消失[7],但在某些情况下血

清肿会持续很长时间,并伴有明显的肿胀或疼痛,而

血清肿的持续存在会使创口延迟愈合、易增加局部

组织感染的概率[8].有回顾性研究[9G10]提示腹腔镜

下腹股沟疝修补术术中腹膜前放置引流管可以明显

减少血清肿的形成,但相关循证医学证据未见报道.

故笔者采用 Meta分析方法系统评价腹腔镜下腹股

沟疝修补术中腹膜前放置引流管对减少血清肿形成

的影响,以期为临床相关治疗提供参考.

1 资料与方法

1.1 文献纳入与排除标准

纳入标准:1)术前诊断腹股沟疝;2)所有研究均

以全文发表在同行评议期刊上,包括前瞻性研究、回

顾性研 究 及 腹 膜 前 放 置 引 流 管 的 随 机 对 照 试 验

(RCT);3)观察组(腹膜前放置引流 管)及 对 照 组

(腹膜前未放置引流管)术式均为 TAPP 或 TEP;

4)年龄≥18岁.

排除标准:1)研究为腹股沟疝开放式修补术;

2)研究为切口疝、非腹股沟疝、嵌顿性或绞窄性疝;

3)非随机对照试验(NRCT);4)年龄<18岁;5)不

能获得相关翔实数据;6)重复研究或使用相同数据

集的二次研究.

1.2 文献检索策略

计算 机 检 索 PubMed、Embase、CochraneLiG

brary、WebofScience、万方、中国生物医学文献服

务系统、中 国 知 网、维 普 等 数 据 库,中 文 检 索 式:

(TAPP或 TEP或腹腔镜下经腹膜外疝修补或腹腔

镜下经 腹 膜 前 疝 修 补)和 引 流,英 文 检 索 式:(tep

ORtotalextraperitonealORtapp ORtransabG

dominalpreperitoneal)ANDdrainage,检索起止日

期:2000年9月至2022年9月.

1.3 数据提取与质量评价

由2名研究人员共同确定检索策略,并独立完

成文献数据的纳入,如有分歧经2人共同讨论后仍

无法达成共识,则引入第三名研究人员来裁定,最后

整合资料与数据.文献质量评价按 CochraneBook

进行.

1.4 统计学方法

使用 RevMan5.3软件进行 Meta分析.计量

资料以均数±标准差表示;年龄、手术时间、术中出

血量、住 院 时 间 等 数 据 为 连 续 型 变 量,以 均 数 差

(MD)表示;性别占比、术后血清肿形成率、术后疼

痛评分等数据为二分类变量,以优势比(OR)作为效

应量;纳入文献均行异质性分析,当 P>0.10,I2 <

50%,认为纳入研究的试验同质性较好,使用固定效

应模型;当P≤0.10,I2>50%,则认为存在异质性,

使用随机效应模型合并统计量进行 Meta分析并进

行敏感性 分 析.各 效 应 量 均 以 95%CI 表 示.以

P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 文献检索结果

总检出文献220篇,其中中文105篇,英文115

28 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第36页

篇.严格按照纳入标准和排除标准,最终筛选出9 篇文献,包括1944例患者.文献筛选流程见图1.

Meta

图1 文献筛选流程图

2.2 文献基本特征和质量评价

纳入9篇文献中总样本量为1944例,其中观察

组1434例,对照组510例.纳入文献的患者基本特

征见表 1.纳 入 文 献 均 有 提 及 随 机 分 配,4 篇 文

献[9G12]选择随机数字表法,其余都没有具体的描述;

仅1篇[10]提及双盲,其余文献盲法方面不具体或不

清楚;所有文献随机分配隐藏/其他偏倚来源均不清

楚,结果数据完整性/选择性报告为低风险.偏倚风

险评估结果见图2.

表1 纳入文献的患者基本特征

第一作者及出版年 n

手术

方式

性别(男/女)/(n/n) 年龄(x±s)/岁

观察组 对照组 观察组 对照组

随访时间/月

辛乐2018[13] 115 TEP 48/0 65/2 55.23±9.84 55.03±10.55 未提及

周荷妹2020[14] 72 TEP 28/8 29/7 49.3±8.9 44.6±7.6 未提及

司仙科2018[11] 68 TAPP 38/0 30/0 67.34±12.54 66.53±12.08 未提及

居建明2020[12] 90 TAPP 42/3 41/4 48.71±15.33 46.06±13.97 12

钟岗2019[15] 64 TAPP 28/2 30/4 59.1±12 60.35±11 未提及

王维2020[16] 50 TAPP 26/0 24/0 56.04±1.41 55.00±1.39 未提及

ISMAIL2009[17] 929 TEP 840/9 79/1 46.8±13.8 39.0±15.8 9~50(中位数22)

FAN2018[10] 78 TEP 39/2 35/2 53.5±14.7 48.9±18.7 7

GAO2014[9] 478 TEP 275/46 122/35 54.2±23.8 47.6±26.8 2~41(中位数24)

图2 偏倚风险评估图

韩 曲等:腹腔镜下腹股沟疝修补术中腹膜前放置引流管减轻血清肿形成的 Meta分析 29

第37页

2.3 结局指标

2.3.1 术后血清肿形成率

9篇文献结果显示观察组术后血清肿形成率显

著低于对照组[OR=0.13,95%CI(0.09~0.19),

Z=9.74,P <0.00001,I2 =42%]. 见 图 3. 但

I2=42%,异质性较高,去掉ISMAIL2009文献进

行敏感性分析,结果显示观察组术后血清肿形成率

显著低于对照组,且异质性降低[OR=0.16,95%CI

(0.1~0.26),Z=7.55,P<0.00001,I2=0%].见

图4.TAPP术中观察组术后血清肿形成率显著低

于对照 组 [OR =0.12,95%CI(0.04~0.31),Z=

4.24,P<0.0001,I2=0%],TEP术中观察组术后

血清肿形成率显著低于对照组[OR=0.19,95%CI

(0.11~0.33),Z=6.01,P<0.00001,I2=0%],且

均具有同质性.见图5.

图3 2组术后血清肿形成比较

图4 2组术后血清肿形成比较(敏感性分析去掉ISMAIL2009文献)

图5 2组不同术式血清肿形成比较

2.3.2 术前性别占比

8篇文献对术前性别占比进行报告.Meta分

析结果显示:观察组与对照组性别占比比较差异无

统计学意义[OR=1.24,95%CI(0.63~2.45),Z=

0.63,P=0.53,I2=0%].

2.3.3 手术时间

9篇文 献 均 对 手 术 时 间 进 行 报 告.因 周 荷 妹

等[14]文献对手术时间描述不详,通过敏感性分析去

30 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第38页

掉该文献,Meta分析结果显示:观察组手术时间长

于对照组[MD =3.39,95%CI(2.30~4.49),Z=

6.06,P<0.00001,I2=17%].见图6.

图6 2组手术时间比较

2.3.4 术中出血量

涉及术中出血量的文献有2篇[13G14],样本量共

187例,观察组86例,对照组103例.结果显示:观

察组术中出血量与对照组比较差异无统计学意义

[MD=0.64,95%CI(-1.54~2.82),Z=0.57,P=

0.57,I2=0%].

2.3.5 术后24h和1周疼痛评分

涉及术 后 24h 和 1 周 疼 痛 评 分 的 文 献 有 2

篇[9,17],样本量共1407例,观察组1170例,对照组

237例.根据疼痛评分指数:1= 无痛,2= 轻度疼

痛,3=中度疼痛,4=重度疼痛,5=无法忍受的疼

痛.取患者疼痛评分≥3分的例数进行研究,结果

显示:观察组与对照组术后24h[OR=0.93,95%CI

(0.65~1.34),Z=0.39,P=0.70,I2=0%]及1周

[OR=0.21,95%CI(0.03~1.52),Z=1.54,P =

0.12,I2=0%]疼痛评分比较差异无统计学意义.

2.4 偏倚检验漏斗图

以术后血清肿形成率作漏斗图,其分布基本对

称,偏倚风险较低.见图7.

0.0

0.5

0.1

1.5

2.0

0.01 0.10 1.00 10.00 100.00

比值比

图7 术后血清肿形成率的偏倚分析漏斗图

3 讨论

血清肿是腹腔镜下腹股沟疝修补术后无法完全

预防的生理过程,超声检查下几乎所有患者均可见

外科解剖区域内有液体渗出和聚集[18].欧洲疝协

会[19]将血清肿分为五型,其中Ⅰ型和Ⅱ型患者有自

感轻微不适,Ⅲ型及以上常伴有并发症,需外科干

预.目前关于腹腔镜下腹股沟疝修补术后血清肿形

成可能有以下原因:1)部分患者因害怕导致手术时

程比较长,这可能导致疝囊与周围组织结构黏连,增

加分离的难度,使得手术后血浆渗出,组织液增多,

进而形成血清肿[15,20].2)巨大疝囊或手术时剥离

创面过多也可导致血浆渗出及组织液生成增多,增

加血清肿形成的风险[4,21G24].3)手术过程中过多使

用电刀,加重对组织的热损伤,使得血管壁、淋巴管

壁被破坏,加剧炎性渗出并聚集在死腔[5,25].4)手

术补片时反复调整位置导致摩擦周围组织引起炎症

反应,且补片贴合不齐也会导致死腔形成,增加液体

积聚的可能性[26G27].5)有报道[28G29]指出,术中补片

固定时使用的医用生物胶会导致血清肿形成率增

加.

如何减少血清肿形成是腹股沟疝临床治疗需关

注的问题.本文 Meta分析结果显示,与不放置引

流管比较,腹股沟疝修补术时腹膜前放置引流管可

显著减少术后血清肿的形成,而且无论采用何种手

术方式(TAPP或 TEP),腹膜前放置引流管均可显

著减少术后血清肿的形成.重要的是,是否放置引

流管对手术时间,术中出血量、术后疼痛评分均无显

著影响(P>0.05),表明腹腔镜下腹股沟疝修补术

后腹膜前放置引流管不仅可减少血清肿形成的发

生,而且具有较好的安全性.结合前述血清肿形成

的可能原因,笔者认为腹膜前放置引流管仍应注意

以下方面:1)引流时间不宜过长,尽量不超过3d,当

引流量少于20~30mL时应及时拔除,过晚拔除引

流管可能会增加导管相关性感染的概率.然而,本

研究入组9篇文献均未提及术后补片发生感染,故

仍需后期增加样本量来验证.2)引流管放置时应紧

贴腹膜与补片之间,远端不超过补片边缘,以减少引

流管对腹膜前组织的刺激.3)引流管引流时可多剪

侧孔,以利于引流液充分引出.4)当引流管从原腹

壁鞘卡孔引出时,应用壁腹膜包埋适当缝合引流管,

使之成为一条隧道,同时腹腔镜监视下拉直引流管,

韩 曲等:腹腔镜下腹股沟疝修补术中腹膜前放置引流管减轻血清肿形成的 Meta分析 31

第39页

使腹腔内引流管紧贴前腹壁,从而避免与腹腔内组

织接触或缠绕,可避免拔管时将肠管或大网膜带出

腹壁鞘卡孔,也可减少补片与肠管的接触.笔者曾

在临床实践中采用在手术区域同侧髂前上棘处戳

孔,置入引流管,使引流管直接从腹膜前引出,未进

入腹腔,显示可减少上述风险的发生.5)如果疝囊

坠入阴囊,通过腹膜前间隙将多剪侧孔的引流管插

入阴囊的远端疝囊,可以同时排出远端疝囊和腹膜

前间隙中的积液,具有持续和充分的引流效果,并且

显著降低血清肿的发生率[4].6)在闭合腹膜后,通

过引流管持续负压吸引抽出远端疝囊和腹膜前间隙

中的 CO2,使腹膜前无法形成空腔,可将网片快速

固定在腹壁和腹膜之间,不仅降低血清肿的形成,还

能促进网片的快速固定,降低慢性疼痛及疝复发的

发生率[30].

综上,在腹腔镜下经腹腹膜前疝修补手术中,不

管使用何种手术方式(TAPP或 TEP),腹膜前放置

引流管均能够有效降低患者术后血清肿的发生率.

但本研究存在一定局限性,入选文献仅局限于是否

腹膜前放置引流管对血清肿形成的影响,对其他因

素如不同手术网片、引流管的材质等影响血清肿形

成研究未有系统性评价,后期可进一步研究.

参考文献:

[1] HEWITTDB,CHOJNACKIK.LaparoscopicgroinherniareG

pair[J].JAMA,2017,318(13):1294.

[2] AGRESTAF,TORCHIARO M,TORDINC.LaparoscopictraG

nsabdominalinguinalherniarepairincommunityhospitalsetG

tings:ageneralsurgeon’slast10yearsexperience[J].Hernia,

2014,18(5):745G750.

[3] MONTGOMERYJ,DIMICKJB,TELEM D A.Management

ofgroinherniasinadultsG2018[J].JAMA,2018,320(10):

1029G1030.

[4] FANG H Z,LIN R G,LIN XC,etal.Drainagedecreasesthe

seromaincidenceinlaparoscopictransabdominalpreperitoneal

(TAPP)herniarepairforlargeinguinoscrotalhernias[J].AsiG

anJSurg,2021,44(3):544G548.

[5] WIRTH U,SALLER M L,VON AHNEN T,etal.LongGterm

outcomeandchronicpaininatraumaticfibringlueversusstaG

plefixationofextralighttitanizedmeshesinlaparoscopicinG

guinalherniarepair(TAPP):asingleGcenterexperience[J].

SurgEndosc,2020,34(5):1929G1938.

[6] LIUJW,CHEN KJ,XU X H,etal.DoestheuseofmonopoG

larenergyasthepreferred modeofdissectioneffectivelyreG

duceseromaformationinlaparoscopictotalextraperitoneal

hernioplasty? AprospectivedoubleGblindedrandomizedcontrol

trial[J].Hernia,2020,24(4):821G829.

[7] AZOURYSC,RODRIGUEZUNDA N,SOARESKC,etal.

TheeffectofTISSEELfibrinsealantonseromaformationfolG

lowingcomplexabdominalwallherniarepair:asingleinstituG

tionalreview andderivedcostanalysis[J].Hernia,2015,19

(6):935G942.

[8] 孙中伟,孙 少 川.腹 腔 镜 腹 股 沟 疝 修 补 术 后 血 清 肿 预 防 与 应

对[J].中华疝和腹壁外科杂志,2018,12(2):144G146.

[9] GAOD,WEIS,ZHAIC,etal.ClinicalresearchofpreperitoneG

aldrainageafterendoscopictotallyextraperitonealinguinal

herniarepair[J].Hernia,2015,19(5):789G794.

[10]FANJK M,LIUJ,CHEN K,etal.PreperitonealclosedGsysG

temsuctiondrainageaftertotallyextraperitonealhernioplasty

intheprevention ofearlyseromaformation:aprospective

doubleGblindrandomisedcontrolledtrial[J].Hernia,2018,22

(3):455G465.

[11] 司仙科,李炜,杨佳华,等.负压引流在腹腔镜经腹腹膜前疝修

补术后减少血清肿的临床应用[J].中华疝和腹壁外科杂志,

2018,12(1):30G33.

[12] 居建明,于国锋.腹膜前引流对腹腔镜经腹腹膜前疝修补术患

者术后血 肿 及 血 清 肿 的 影 响 [J].中 华 疝 和 腹 壁 外 科 杂 志,

2020,14(5):493G496.

[13] 辛乐,叶进军,阎玉矿.腹腔镜完全腹膜外双侧腹股沟疝修补术

中留置负压引流管预防术后血清肿的临床体会[J].腹腔镜外

科杂志,2018,23(12):931G933,939.

[14] 周荷妹,钱利强,王刚.腹腔镜完全腹膜外疝修补术预防性放置

负压引流管的疗效[J].中华疝和腹壁外科杂志,2020,14(4):

355G358.

[15] 钟岗,卓茜,张楠.腹膜前间隙放置引流管在预防双侧 TAPP术

后血清肿 的 临 床 对 照 研 究 [J].中 国 中 西 医 结 合 外 科 杂 志,

2019,25(6):973G976.

[16] 王维,郭文静.负压引流措施对腹腔镜经腹腹膜前疝修补术后

临床血清肿发生率的影响[J].中华疝和腹壁外科杂志,2020,

14(1):27G29.

[17]ISMAIL M,GARG M,RAJAGOPAL M,etal.ImpactofcloG

sedGsuctiondraininpreperitonealspaceontheincidenceofseG

romaformationafterlaparoscopictotalextraperitonealinguiG

nalherniarepair[J].Surg LaparoscEndoscPercutan Tech,

2009,19(3):263G266.

[18]CIHANA,OZDEMIR H,UÇANBH,etal.Fadeorfate.SeroG

mainlaparoscopicinguinalherniarepair[J].Surg Endosc,

2006,20(2):325G328.

[19]MUYSOMSF,CAMPANELLIG,CHAMPAULT G G,etal.

EuraHS:thedevelopmentofaninternationalonlineplatform

forregistrationandoutcomemeasurementofventralabdomiG

nalwallherniarepair[J].Hernia,2012,16(3):239G250.

[20] 陈杰,那冬鸣,申英末.局部神经阻滞麻醉下内置弹力记忆环

(Kugel补片)的腹膜前无张力疝修补术[J].中华腹部疾病杂

志,2004,4(12):865G867.

[21] 李厚泽,綦晓龙.腹腔镜经腹腹膜前疝修补术中缝合疝缺损联

合负压引流的 应 用 价 值 [J].成 都 医 学 院 学 报,2021,16(3):

337G340.

[22] 李英儒,甘文昌,曾兵,等.腹腔镜经腹腹膜前修补术治疗巨大阴

囊疝5例分析[J].中国实用外科杂志,2020,40(11):1320G1323.

(下转第38页)

32 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第40页

收稿日期:2023G07G21

基金项目:上海市自然科学基金面上项目(23ZR1447600)

作者简介:呼广杰(1982—),男,本科,主治医师,主要从事心血管疾病的研究.

通信作者:石磊,主治医师,EGmail:42349725@qq.com.

Rotarex减容系统联合药物球囊

治疗下肢动脉支架内再狭窄效果分析

呼广杰1,石 磊1,苟小军2

(1.上海市松江区泗泾医院心血管内科,上海 201601;

2.上海市宝山区中西医结合医院中心实验室,上海 201999)

摘要:目的 探究 Rotarex减容系统联合药物球囊治疗下肢动脉支架内再狭窄的有效性及安全性.方法 选取

2018年2月至2021年11月于上海市松江区泗泾医院心血管内科进行治疗的82例支架内再狭窄患者的临床资料

进行回顾性分析,其中接受 Rotarex减容系统联合药物球囊治疗患者43例(联合治疗组),单纯药物球囊治疗患者

39例(单纯球囊治疗组).术后进行12个月随访,比较2组手术结局,踝肱指数(ABI)和 Rutherford分级,以及原

发通畅率、免于靶血管血运重建(TVR)率、临床症状改善、血流动力学改善和并发症发生等远期结局指标.结果

2组患者均成功完成手术治疗,技术成功率100%;手术前,2组 ABI比较差异无统计学意义(P>0.05),术后12个

月,联合治疗组 ABI明显高于单纯球囊治疗组(P<0.05);手术前,2组 Rutherford分级比较差异无统计学意义

(P>0.05);术后6个月及 12个月,联合治疗组 Rutherford分级 4和 6级 例 数 显 著 少 于 单 纯 球 囊 治 疗 组(P<

0.05);术后12个月时,联合治疗组免于 TVR率显著高于单纯药物球囊治疗组(P=0.0324),而2组血流动力学改

善、临床症状改善、并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Rotarex减容系统联合药物球囊治疗

下肢动脉支架内再狭窄是安全有效的治疗方案,且在原发通畅率及免于 TVR率上均优于单纯药物球囊治疗.

关键词:机械血栓清除;下肢动脉;支架内再狭窄;药物球囊

中图分类号:R654.4 文献标志码:A 文章编号:2095G4727(2023)06-0033-06

DOI:10.13764/j.cnki.ncdm.2023.06.006

RotarexThrombectomyCombinedwithDrugGCoated

BalloonforLowerExtremityArteryInGstentRestenosis

HUGuangGjie,SHILei,GOUXiaoGjun

(1.DepartmentofCardiovascularMedicine,SongjiangDistrictSijingHospital,

Shanghai201601,China;2.CentralLaboratory,BaoshanDistrictHospitalof

IntegratedTraditionalChineseand WesternMedicine,Shanghai201999,China)

ABSTRACT:Objective ToevaluatetheefficacyandsafetyofRotarexthrombectomycombined

withdrugGcoatedballooninthetreatmentoflowerextremityarteryinGstentrestenosis.Methods

Clinicaldataof82patientswithlowerextremityarteryinGstentrestenosiswhoreceiveddrugGcoaG

tedballoonangioplastyalone(39patients)orincombinationwithRotarexthrombectomy(43paG

tients)indepartmentofcardiovascularmedicine,SijingHospitalfrom February2018toNovemG

ber2021wereretrospectivelyanalyzed.Allthepatientswerefollowedupfor1year.SurgicaloutG

comes,anklebrachialindex(ABI),Rutherfordgrade,primarypatencyrate,freedomfromtarget

vesselrevascularization(TVR)rate,clinicalsymptoms,hemodynamicsandcomplicationswere

comparedbetweenthetwogroups.Results AllpatientssuccessfullycompletedsurgicaltreatG

南昌大学学报(医学版)2023年第63卷第6期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2023,Vol.63No.6 33

第41页

ment,withatechnicalsuccessrateof100%.Therewasnosignificantdifferenceinpreoperative

ABIbetweenthetwogroups(P>0.05).However,theABIinthecombinedtreatmentgroupwas

higherthanthatintheballoontreatmentgroupat12 monthsaftersurgery(P <0.05).Before

treatment,therewasnosignificantdifferenceinRutherfordgradebetweenthetwogroups(P>

0.05).At6monthsand12monthsaftersurgery,thenumbersofpatientswithRutherfordgrades

4and6inthecombinedtreatmentgroupwerelowerthanthoseintheballoontreatmentgroup

(P<0.05).At12monthsafteroperation,thefreedomfrom TVRrateinthecombinedtreatment

groupwashigherthanthatintheballoontreatmentgroup(P=0.0324).Therewerenosignificant

differencesinhemodynamicimprovement,clinicalsymptomimprovementandincidenceofcomG

plicationsbetweenthetwogroups(P>0.05).Conclusion Rotarexthrombectomycombinedwith

drugGcoatedballoonangioplastyissafeandeffectiveforlowerextremityarteryinGstentrestenoG

sis,andthecombinationissuperiortoballoonangioplastyaloneinprimarypatencyrateandfreeG

domfrom TVRrate.

KEY WORDS:Rotarexthrombectomy;lowerextremityartery;inGstentrestenosis;

drugGcoatedballoon

自膨式金属裸支架是治疗下肢动脉硬化闭塞症

最常采用的方法[1],然而,患者术后1年内支架内再

狭窄的发生率可高达14%~50%

[2].治疗支架内

再狭窄的方法包括使用普通球囊和药物球囊进行重

复腔内血管成形术,使用自膨式金属裸支架、覆膜支

架或药物洗脱支架进行再次支架植入,或经导管的

动脉粥样硬化切除术,如激光消蚀术、定向斑块旋切

装置和机械吸栓术[3]等.但目前针对支架内再狭窄

的治疗仍缺乏统一的标准.有研究[5]认为,联合减

容和药物球囊对支架内再狭窄的疗效较好,该方案

先进行减容手术,然后经药物球囊血管成形术,术后

支架的通畅性较高.本研究通过回顾性分析 RoG

tarex减容系统联合药物球囊治疗对下肢动脉支架

内再狭窄的疗效,发现相比单纯球囊治疗,该联合治

疗方案表现出更好的疗效,具体报告如下.

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年2月至2021年11月于上海市松

江区泗泾医院心血管内科进行治疗的82例支架内

再狭窄患者的临床资料进行回顾性分析,其中接受

Rotarex减容系统联合药物球囊治疗患者43例(联

合治疗组),单纯药物球囊治疗患者39例(单纯球囊

治疗组).2 组间术前基线资料(年龄、性别、高 血

压、糖尿病、高脂血症、冠状动脉疾病、颈动脉疾病、

吸烟、病变长度、血管直径及 Tosaka分级)比较差

异无统计学意义(P>0.05),均衡可比,见表1.

纳入标准:1)年龄18~80岁;2)Rutherford分

级2-6级;3)有下肢动脉支架植入史,术前血管彩

超提示支架内中G低回声填充,下肢动脉 CT 血管造

影(CTA)提示支架内狭窄程度≥50%.

排除标准:1)溶栓抗凝禁忌证者;2)严重心肺肾

功能不全者.

本研究通过本院伦理委员会批准.

表1 2组基线资料比较

项目 联合治疗组(n=43) 单纯球囊治疗组(n=39) P

年龄(x±s)/岁 67.2±11.6 68.4±13.6 0.66

性别(男/女) 28/15 24/15 0.82

高血压/n(%) 38(88.3) 33(84.6) 0.74

糖尿病/n(%) 24(55.8) 20(51.2) 0.82

高脂血症/n(%) 33(76.7) 27(69.2) 0.46

冠状动脉疾病/n(%) 12(27.9) 8(20.5) 0.45

颈动脉疾病/n(%) 7(16.2) 5(12.8) 0.75

吸烟/n(%) 30(69.7) 24(61.5) 0.48

病变长度(x±s)/cm 18.3±8.7 17.6±6.8 0.68

血管直径(x±s)/mm 4.87±0.93 4.53±0.76 0.07

34 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第42页

表1(续)

项目 联合治疗组(n=43) 单纯球囊治疗组(n=39) P

Tosaka分型/n(%) 0.60

Ⅰ型 7(16.2) 4(10.3)

Ⅱ型 19(44.1) 16(41.0)

Ⅲ型 17(39.7) 19(48.7)

随访时间(x±s)/月 12.7±4.8 11.9±6.5 0.52

1.2 治疗方法

单纯球囊治疗组:采用经股动脉入路,利用球囊

对目标病变进行充分预扩张,以避免发生夹层.根

据预扩张结果,明确是否进行药物球囊扩张治疗.

对于符合治疗条件的患者,引入适当直径和长度的

药物球囊,达到病变部位后以 7~8atm(1atm=

101.325kPa)持续贴壁扩张30~60s.

联合治疗组:在局麻下通过同侧或对侧股动脉

途径使用6F 或 8F Rotarex 血栓清除导管进行治

疗.在全身肝素化(5000U)后,将导丝缓慢导入达

到远端真腔,使用0.018″导丝.沿着导丝缓慢交替

将 Rotarex导管的尖端前移至病变远端1cm 处,至

少重复2次操作后进行血管造影.随后进行药物球

囊血管成形术,确保药物球囊的长度完整覆盖病变

范围两端边缘1cm,必要时可使用第 2 个药物球

囊,扩张时间应不少于120s.

手术结束后,2组均常规接受12个月的双重抗血小

板治疗(阿司匹林150mg?d-1,氯吡格雷75mg?d-1).

1.3 观察指标

1)手术技术成功(成功完成手术,且治疗后支架

内残余狭窄<30%)率及围手术期不良反应.

2)踝肱指数(ABI).于脚踝处(足背动脉或胫

后动脉)测量收缩压与肱动脉测量收缩压比值,肱动

脉的收缩压取双臂较高者,踝部收缩压取患肢.分

别在术前,术后6个月和术后12个月时测量2组静

息、平卧时的 ABI.

3)Rutherford分级.1级:轻度间歇性跛行,跛

行距离500m 以上;2级:中度间歇性跛行,跛行距

离为300~500m;3级:重度间歇性跛行,跛行距离

300m 以下;4级:出现静息痛,即静息状态下也可

出现下肢沉重、麻木、疼痛的症状;5级:少量组织缺

损或者活动性溃疡;6级:大面积组织坏疽或缺损.

分别在术前、术后6个月和术后12个月时对2组进

行 Rutherford分级.

4)远期结局指标.术后6个月和12个月时比

较2组各项远期结局指标,包括保肢率(随访期间术

后免于足踝平面以上截肢患者的百分比)、原发通畅

率(治疗段血管没有闭塞及明显的再狭窄,即狭窄<

50%)、免于靶血管血运重建(TVR)率以及各种远

期并发症的发生率.

1.4 统计学方法

使用SPSS25.0软件进行数据分析.计量资料

以均数±标准差(x±s)表示,比较采用配对t检验.

计数资料以%表示,比较采用χ2 检验.以P<0.05

为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 手术技术成功率及围手术期不良反应

2组 均 顺 利 完 成 手 术 治 疗,技 术 成 功 率 均 为

100%.联合治疗组住院期间无手术相关死亡,无围

手术期动脉穿孔、破裂出血、假性动脉瘤、脑卒中、肾

功能衰竭、死亡等严重不良事件发生,发生远端动脉

栓塞2例,予以溶栓治疗后症状明显改善,术后出现

小腿骨筋膜室综合征1例,予以消肿对症处理后症

状明显缓解.单纯药物球囊治疗组住院期间无手术

相关死亡,无围术期动脉穿孔、破裂出血、假性动脉

瘤、脑卒中、肾功能衰竭、死亡等严重不良事件发生,

术后出现血红蛋白尿2例,无腰痛及肌酐升高等表

现,予以对症治疗后24h内症状消失.

2.2 2组术前及术后 ABI比较

手术前,2组 ABI比较差异无统计学意义(P>

0.05);术后6个月及12个月,2组 ABI均较术前升

高(P<0.05);术后12个月,联合治疗组 ABI明显

高于单纯球囊治疗组(P<0.05).见表2.

表2 2组术前及术后 ABI比较 x±s

组别 n 术前 术后6个月 术后12个月

联合治疗组 43 0.42±0.11 0.94±0.15∗ 0.91±0.17∗

单纯球囊治疗组 39 0.45±0.15 0.89±0.18∗ 0.84±0.14∗

t 1.024 1.359 2.042

P 0.156 0.091 0.024

∗P<0.05与同组术前比较.

呼广杰等:Rotarex减容系统联合药物球囊治疗下肢动脉支架内再狭窄效果分析 35

第43页

2.3 2组术前及术后 Rutherford分级比较

手术前,2组 Rutherford分级比较差异无统计

学意义(P>0.05);术后6个月及12个月,联合治

疗组 Rutherford分级4和6级例数显著少于单纯

球囊治疗组(P<0.05).

表3 2组术前及术后 Rutherford分级比较 n(%)

Rutherford分级

联合治疗组(n=43) 单纯球囊治疗组(n=39)

术前 术后6个月 术后12个月 术前 术后6个月 术后12个月

2级 3(7.0) 2(4.65) 1(2.3) 2(5.1) 1(2.6) 1(2.6)

3级 8(18.6) 3(6.98) 4(9.3) 7(18.0) 8(20.5) 7(18.0)

4级 14(32.6) 7(16.28) 5(11.6) 11(28.2) 11(28.2)∗ 10(25.6)∗

5级 15(34.9) 15(34.88) 15(34.9) 16(41.0) 13(33.3) 15(38.5)

6级 3(7.0) 16(37.21) 18(41.9) 3(7.7) 6(15.4)∗ 6(41.0)∗

∗P<0.05与同时期联合治疗组比较.

2.4 2组远期结局比较

术后6 个 月,联 合 治 疗 组 原 发 通 畅 率 93.0%

(40/43),3例术后出现再狭窄,2例接受保守治疗,1

例行经皮腔内血管成形术(PTA)联合支架成形,免

于 TVR率为42/43(97.6%);单纯药物球囊治疗组

原发通畅率33/39(84.6%),6例术后出现再狭窄,2

例接受保守治疗,4例行 PTA 联合支架成形,免于

TVR率为35/39(89.7%).术后12个月,联合治疗

组原发通畅率为37/43(86.0%),2例行 PTA 后血

运恢复,免于 TVR 率为40/43(93.0%);单纯药物

球囊治疗组原发通畅 率 为 28/39(71.7%),6 例 行

PTA 后血运恢复,免于 TVR 率为29/39(74.3%).

术后12个月时,联合治疗组免于 TVR 率显著高于

单纯药物球囊治疗组(P=0.0324).见表4.

表4 2组远期结局指标比较 n(%)

项目

联合治疗组(n=43) 单纯球囊治疗组(n=39)

术后6个月 术后12个月 P 术后6个月 术后12个月 P

原发通畅率 40(93.0) 37(86.0) 0.164 33(84.6) 28(71.7) 0.090

免于 TVR率 42(97.6) 40(93.0) 0.250 35(89.7) 29(74.3)∗ 0.050

血流动力学改善 32(74.4) 30(69.7) 0.170 29(74.3) 27(69.2) 0.180

临床症状改善 34(79.0) 37(86.0) 0.158 28(71.8) 29(74.3) 0.200

并发症

死亡 0(0.0) 1(2.3) 0.500 1(2.6) 3(7.7) 0.250

心肌梗死 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0)

脑卒中 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0)

肾功能衰竭 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0)

大出血 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0)

截肢 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 1(2.6) 0.500

血栓形成 1(2.3) 2(4.6) 0.379 1(2.6) 3(7.7) 0.250

∗P=0.0324与同时期联合治疗组比较.

3 讨论

随着技术及材料的不断进步,腔内治疗下肢动

脉硬化闭塞症备受瞩目,而其中以自膨式金属裸支

架的应用最为广泛.自膨式金属裸支架因其创伤

小、疗效确切等优势而备受青睐,然而腔内治疗后支

架内再狭窄的发生率较高.从病理生理学的角度来

看,支架内再狭窄主要是由于支架的挤压作用导致

血管壁损伤,刺激血管内膜增生并产生细胞外基质

沉积.同时,由于内膜下的胶原等物质的暴露刺激

了相关的炎症介质生成,进而引起损伤区域平滑肌

的增生,最终导致再狭窄.为了克服这一问题,药物

球囊被引入,通过向病变血管壁释放抗增殖药物,从

而抑制血管内膜的增生[6].在药物球囊释放药物

时,球囊能够充分接触血管壁,使血管壁组织能够有

效吸收紫杉醇等药物,从而发挥抑制内膜增生的作

用[7].

国内外已经开展了许多关于药物球囊治疗股腘

动脉支架内再狭窄效果的研究[8].其中一项研究[9]

结果表明,与普通球囊 PTA 组相比,药物球囊组在

术后12个月的原发通畅率分别为40.7%和13.4%,

差异显著(P=0.02).此外,药物球囊组的术后12

个月免于目标血管再重建(TVR)的比率为49%,而

普通球囊 PTA 组为22.1%(P=0.11).2组在术后

36 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第44页

12个月的 TVR率之间差异没有统计学意义.这些

数据显示,相较于普通球囊,药物球囊在原发通畅率

和免于 TVR率上表现更好.另一项最近的研究[10]

发现,药 物 球 囊 治 疗 支 架 内 再 狭 窄 [病 变 长 度 为

(86±32)mm]后1年的原发通畅率为83.7%,免于

TVR率为90.2%.这些研究结果都强调了药物球

囊相对于单纯球囊治疗支架内再狭窄的更好疗效.

然而需要注意的是,药物球囊治疗后依然可能发生

再狭窄[11],有研究[12]指出药物球囊组1年内再狭窄

发生率高达29.5%.考虑到支架内再狭窄部位存

在大量血栓成分,单纯球囊扩张难以取得满意的效

果,同时血栓成分可能会阻碍药物渗透到病变部位,

影响药物的药理作用.

此外,近期有学者提出减容的理念用于治疗,包

括激光消蚀术、定向斑块旋切装置和机械吸栓术等.

DIPPEL 等[13]的研究发现激光消蚀术联合单纯球

囊扩张在术后6个月内的免于 TVR 率显著高于单

纯球囊扩张组(73.5%比51.8%,P<0.005).相关

研究显示减容治疗短期疗效明显,但在中长期疗效

方面并无显著优势.近期有学者研究利用药物球囊

血管成形术联合减容治疗(包括激光消蚀术、血栓清

除术等)支架内再狭窄显示了较好的疗效.然而,考

虑到激光消蚀术费用较高,应用有限,而血栓切除术

操作复杂,需多次调整方向,同时易造成小斑块脱

落,安全性欠佳[14].相较于其他减容治疗方法,RoG

tarex具有独特的优点.Rotarex机械血栓清除系

统的工作原理是通过高速旋转的转子将病变部位的

血栓粉碎,并通过形成负压直接将其排出体外.目

前认为它具有操作简单、能够快速、有效地清除病变

部位血栓,且较少引起血管壁损伤及穿孔的发生,因

此相 对 安 全[15].KRONLAGE 等[16] 的 研 究 发 现

Rotarex减容系统治疗下肢急性、亚急性和慢性缺

血性疾病的疗效,即刻成功率高,随访1年时的保肢

率高达94.3%.LOFFROY 等[17]进行的回顾性研

究纳入了128例支架内再狭窄或闭塞的患者,发现

Rotarex手术成功率可高达96.9%.然而,由于血

管情况较为复杂,常需要辅助腔内血管成形术进行

治疗,在 研 究 中 64% 患 者 联 合 腔 内 血 管 成 形 术,

20%联合腔内血管成形术和支架植入,术后12个月

的首发通畅率为88%.

结合以上研究,本研究在临床实践中采用 RoG

tarex减容系统联合药物球囊治疗下肢动脉支架内

再狭窄,并比较了联合治疗方案与单纯药物球囊治

疗下肢动脉支架内再狭窄的效果.本研究结果显

示,Rotarex减容系统联合药物球囊治疗在改善血

液动力学方面表现出色.术后,其原发通畅率及免

于 TVR率均优于单纯药物球囊治疗患者,并且结

果数据明显优于先前单纯采用药物球囊治疗或联合

减容治疗的研究[18G19]所报告结果.具体而言,RoG

tarex减容系统联合药物球囊治疗组与单纯药物球

囊治疗组在术后1年时的免于 TVR率分别为93%

和74.3%(P=0.0324),显示出 Rotarex减容系统联

合药物球囊相对于单纯药物球囊治疗具有更佳的疗

效.分析其原因在于,单纯球囊治疗虽然可以改善

再狭窄部位的血流循环,但术后仍然存在再狭窄的

风险,通常需要进一步治疗.相较之下,Rotarex减

容系统的应用能够清除再狭窄部位的血栓,为药物

球囊发挥疗效提供更有利的环境,因此能够更有效

地改善术后血液循环,呈现出更佳的疗效.

在手术的安全性方面,有研究[20]报道 Rotarex

减容系统治疗下肢动脉闭塞性疾病时发生远端栓塞

率为6%,穿孔率1.2%.本研究中,联合组远端栓

塞发生率为4.6%(2/43),且住院期间无动脉穿孔、

破裂出血、假性动脉瘤、脑卒中、肾功能衰竭、死亡等

严重不良事件的发生,显示出该治疗方案具有较高

的安全性.

综上所述,Rotarex减容系统联合药物球囊治

疗下肢动脉支架内再狭窄是安全有效的治疗方案,

且在原发通畅率及免于 TVR 率上均优于单纯药物

球囊治疗.然而,本研究存在一定局限性,主要体现

在其为单中心回顾性研究,样本量相对有限.未来

的研究应当朝着多中心、大样本、前瞻性随机对照研

究的方向发展,以更全面、可靠地评估该联合治疗的

长期疗效.同时,还需深入探讨影响支架内再狭窄

发生的独立影响因素,以更好地指导相关治疗策略

的制定.

参考文献:

[1] HEZP,WANG H R,LINF,etal.Thesafetyandefficacyof

differentendovasculartreatmentsforinGstentrestenosisofthe

femoropoplitealartery:anetworkmetaGanalysis[J].VascMed,

2022,27(3):239G250.

[2] RYMERJA,JONES W S.FemoropoplitealinGstentrestenosis[J].

CircCardiovascInterv,2018,11(12):e007559.

[3] ARU R G,TYAGISC.EndovasculartreatmentoffemoropoG

plitealarterialocclusivedisease:currenttechniquesandlimitaG

tions[J].SeminVascSurg,2022,35(2):180G189.

[4] KIM W,CHOID.TreatmentoffemoropoplitealarteryinGstent

restenosis[J].KoreanCircJ,2018,48(3):191G197.

[5] SCHMIDTA,ZELLERT,SIEVERTH,etal.Photoablationusing

呼广杰等:Rotarex减容系统联合药物球囊治疗下肢动脉支架内再狭窄效果分析 37

第45页

theturboGboosterandexcimerlaserforinGstentrestenosistreatG

ment:twelveGmonthresultsfromthePATENTstudy[J].JEnG

dovascTher,2014,21(1):52G60.

[6] «药物涂层球囊临床应用中国专家共识»专家组.药物涂层球囊

临床应用中国专家共识[J].中国介入心脏病学杂志,2016,24

(2):61G67.

[7] 张娟,李玉宏,冯卫,等.超声多参数评分量表对颈动脉狭窄患

者颈动脉支架植入术或颈动脉内膜剥脱术不良转归事件的预

测价值[J].陕西医学杂志,2022,51(3):351G354.

[8] 冯逢,顾立学.冠状动脉支架植入术后应用氯吡格雷对患者焦

虑、抑郁、应对方式等应激反应影响的临床研究[J].陕西医学

杂志,2021,50(1):58G61.

[9] KINSTNERC M,LAMMERJ,WILLFORTEHRINGER A,

etal.PaclitaxelGelutingballoonversusstandardballoonangioG

plastyininGstentrestenosisofthesuperficialfemoralandproxG

imalpoplitealartery:1GyearresultsofthePACUBAtrial[J].

JACCCardiovascInterv,2016,9(13):1386G1392.

[10] BAGUE N,JULIA P,SAUGUET A,etal.Femoropopliteal

inGstentrestenosisrepair:midterm outcomesafterpaclitaxel

elutingballoonuse(PLAISIRtrial)[J].EurJVascEndovasc

Surg,2017,53(1):106G113.

[11] FAN WJ,LUSS,TANJY,etal.MidtermresultsofdrugG

coatedballoonaloneorcombinedwithRotarexthrombectoG

mydevicefortreatmentofsubacutefemoropoplitealartery

thromboticocclusion[J].AnnVascSurg,2023,92:240G248.

[12] KRANKENBERG H,TÜBLER T,INGWERSEN M,etal.

DrugGcoatedballoonversusstandardballoonforsuperficial

femoralarteryinGstentrestenosis:therandomizedfemoralarG

teryinGstentrestenosis(FAIR)trial[J].Circulation,2015,132

(23):2230G2236.

[13] DIPPELEJ,MAKAM P,KOVACH R,etal.RandomizedconG

trolledstudyofexcimerlaseratherectomyfortreatmentoffemoG

ropoplitealinGstentrestenosis:initialresultsfromtheEXCITE

ISRtrial(EXCImerlaserrandomizedcontrolledstudyfor

treatmentofFemoropopliTEalinGstentrestenosis)[J].JACC

CardiovascInterv,2015,8(1PtA):92G101.

[14] MILNEROWICZ A,MILNEROWICZ A,KULICZKOWSKI

W,etal.RotationalatherectomyplusdrugGcoatedballoonanG

gioplastyforthetreatmentoftotalinGstentocclusionsiniliac

andinfrainguinalarteries[J].JEndovascTher,2019,26(3):

316G321.

[15] SIMONTEG,FINOG,CASALIF,etal.Effectivenessofthe

Rotarexexcisionalatherectomysysteminbothsubacuteand

chronicaortoiliacendograftthrombosis:aninnovativeoption

forthemodernendovascularsurgeontoolkit[J].JEndovasc

Ther,2022:15266028221105177.Epubaheadofprint.

[16] KRONLAGE M,PRINTZI,VOGELB,etal.Acomparative

studyonendovasculartreatmentof(sub)acutecriticallimb

ischemia:mechanicalthrombectomyvsthrombolysis[J].Drug

DesDevelTher,2017,11:1233G1241.

[17] LOFFROYR,EDRISSN,GOYAULTG,etal.Percutaneous

mechanicalatherothrombectomyusingtheRotarex?Sdevice

inperipheralarteryinGstentrestenosisorocclusion:aFrench

retrospectivemulticenterstudyon128patients[J].QuantImG

agingMedSurg,2020,10(1):283G293.

[18] 范国萍,闫新慧.通络养心汤对急性心肌梗死经皮冠状动脉介

入术后高缺血风险患者血小板抑制率及出血事件的影响[J].

陕西中医,2019,40(8):1025G1028.

[19] 樊秋娥,王宁辉,梁君昭,等.梁君昭教授治疗冠心病支架术后

心绞痛的经验[J].陕西中医药大学学报,2019,42(3):16G17,

24.

[20] WISSGOTT C,KAMUSELLA P,RICHTER A,etal.MeG

chanicalrotationalthrombectomyfortreatmentthrombolysis

inacuteandsubacuteocclusionoffemoropoplitealarteries:

retrospectiveanalysisoftheresultsfrom 1999to2005[J].

Rofo,2008,180(4):325G331.

(责任编辑:李松旻)

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(上接第32页)

[23] 秦兴陆,梁云,史栗丰,等.腹腔镜下完全腹膜外腹股沟疝修补

术中放置负压引流管的临床体会[J].腹腔镜外科杂志,2012,

17(12):951G953.

[24] 朱文浪,张欢,吴浩荣,等.腹腔镜下完全腹膜外疝修补术后未

留置引流管的效果评价[J].中华腔镜外科杂志,2016,9(5):

290G293.

[25] 纪光伟,吴远志,王旭,等.高频电刀对腹部切口愈合影响的实

验和临床研究[J].中华医学杂志,2002,82(17):1199G1202.

[26] KÖCKERLING F,HANTELE,ADOLFD,etal.Dodrains

haveanimpactontheoutcomeafterprimaryelectiveunilaterG

alinguinalherniarepairin men? [J].Hernia,2020,24(5):

1083G1091.

[27] LUO H L,ZHANG H L,SUN J M,etal.Laparoscopic

transabdominalpreperitonealapproachwithnegativepressure

drainageforgiantinguinalhernia[J].JLaparoendosc Adv

SurgTechA,2021,31(8):931G936.

[28] NOVIKB,HAGEDORNS,MÖRK UB,etal.Fibringluefor

securingthemeshinlaparoscopictotallyextraperitonealinG

guinalherniarepair:astudywitha40GmonthprospectivefolG

lowGupperiod[J].SurgEndosc,2006,20(3):462G467.

[29] 申英末,陈杰,刘素君,等.康派特医用胶在腹股沟疝无张力修

补术中的应用[J].中华疝和腹壁外科杂志,2010,4(1):17G21.

[30] HONIGMANNP,FISCHER H,KURMANN A,etal.InvesG

tigatingtheeffectofintraGoperativeinfiltrationwithlocalanG

aesthesiaonthedevelopmentofchronicpostoperativepainafG

teringuinalherniarepair.ArandomizedplacebocontrolledtriG

pleblindedandgroupsequentialstudydesign[NCT00484731]

[J].BMCSurg,2007,7:22.

(责任编辑:黄永红)

38 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第46页

收稿日期:2023G08G01

基金项目:国家卫健委医药卫生科技发展研究中心课题项目(WA2020HK49)

作者简介:荆竹山(1969—),男,本科,副主任医师,主要从事新生儿疾病的诊断与治疗研究.

系统性红斑狼疮患儿治疗前血清 MIF、MMPG9

水平测定及其对预后的预测价值分析

荆竹山,邱迎军

(运城市中心医院新生儿科,山西 运城044099)

摘要:目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患儿治疗前血清巨噬细 胞 移 动 抑 制 因 子(MIF)、基 质 金 属 蛋 白 酶G9

(MMPG9)的水平并分析其对患儿预后的预测价值.方法 选取2020年2月至2022年6月运城市中心医院收治

的首诊SLE患儿126例,所有患儿均接受常规药物治疗并随访1年,随访期间观察患儿预后情况并根据有无器官

损伤分为预后不良组(n=39)和预后良好组(n=87).比较2组的基线资料、治疗前血清学指标[红细胞沉降率

(ESR)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、MIF、MMPG9]水平;Pearson相关分析患儿血清 MIF与 MMPG9水平

的关系;Logistic回归分析SLE患儿预后的影响因素;绘制 ROC及决策曲线分析治疗前血清 MIF、MMPG9水平对

SLE患儿预后的预测价值.结果 SLE患儿预后不良率为30.95%(39/126);2组患儿疾病活动度比较,差异有统

计学意义(P<0.05).预 后 不 良 组 治 疗 前 血 清 ESR、PCT、CRP 及 MIF、MMPG9 水 平 均 高 于 预 后 良 好 组 (P <

0.05).血清 MIF与 MMPG9水平呈正相关(r=0.466,P<0.001);高疾病活动度、高水平 ESR、PCT、CRP、MIF、

MMPG9是SLE患儿预后不良的独立危险因素(OR>1,P<0.05);血清 MIF、MMPG9水平单独及联合预测 SLE患

儿预后的AUC>0.70;阈值在0.0~1.0范围内血清 MIF、MMPG9联合预测 SLE 患儿预后的净收益率>0.结论

治疗前血清MIF、MMPG9水平在预后不良SLE患儿更高;二者可有效预测患儿预后,且联合预测的价值更高.

关键词:系统性红斑狼疮;巨噬细胞移动抑制因子;基质金属蛋白酶G9;预后;儿童

中图分类号:R725.9 文献标志码:A 文章编号:2095G4727(2023)06-0039-05

DOI:10.13764/j.cnki.ncdm.2023.06.007

Serum MIFandMMPG9LevelsbeforeTreatmentinChildren

withSystemicLupusErythematosusandTheirPrognosticValues

JINGZhuGshan,QIUYingGjun

(DepartmentofNeonatology,YunchengCentralHospital,Yuncheng044099,China)

ABSTRACT:Objective Todetermineserum macrophagemigrationinhibitoryfactor(MIF)and

matrixmetalloproteinaseG9(MMPG9)levelsbeforetreatmentinchildrenwithsystemiclupuseryG

thematosus(SLE),andtoanalyzetheirprognosticvalues.Methods Atotalof126childrenwith

SLEwhowerediagnosedforthefirsttimeinYunchengCentralHospitalfromFebruary2020to

June2022wereselected.Allthechildrenweretreatedwithconventionaldrugsandfollowedupfor

1year.Accordingtothepresenceorabsenceoforgandamage,thesechildrenweredividedinto

poorprognosisgroup(n=39)andgoodprognosisgroup(n=87).Thebaselinedataandserological

indexes[erythrocytesedimentationrate(ESR),procalcitonin(PCT),CGreactiveprotein(CRP),

MIFandMMPG9]werecomparedbetweenthetwogroups.Therelationshipbetweenserum MIF

andMMPG9levelswasanalyzedusingPearson’scorrelationanalysis.Logisticregressionanalysis

wasusedtotesttheinfluencingfactorsofprognosis.TheROCanddecisioncurvesweredrawnto

analyzetheprognosticvaluesofserum MIFandMMPG9levelsbeforetreatmentinchildrenwith

南昌大学学报(医学版)2023年第63卷第6期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2023,Vol.63No.6 39

第47页

SLE.Results Thepoorprognosisratewas30.95%(39/126).Therewasasignificantdifferencein

diseaseactivitybetweenthetwogroups(P<0.05).ThelevelsofESR,PCT,CRP,MIFandMMPG

9inthepoorprognosisgroupwerehigherthanthoseinthegoodprognosisgroup(P<0.05).The

MIFlevelwaspositivelycorrelatedwiththeMMPG9level(r=0.466,P<0.001).HighdiseaseacG

tivityandhighlevelsofESR,PCT,CRP,MIFandMMPG9beforetreatmentwereindependentrisk

factorsforpoorprognosisinchildrenwithSLE(OR>1,P<0.05).TheAUCsofserum MIFand

MMPG9aloneandincombinationtopredicttheprognosiswere>0.70.Thecombinedpredictionof

serum MIFandMMPG9withinthethresholdrangeof0.0G1.0hadanetreturnrateof>0forpreG

dictingtheprognosisofSLEpatients.Conclusion Serum MIFand MMPG9levelsbeforetreatG

mentarehigherinSLEchildrenwithpoorprognosis.BothMIFandMMPG9caneffectivelypredict

theprognosisinSLEchildren.Especially,thecombinedpredictionhasahighervalue.

KEY WORDS:systemiclupuserythematosus;macrophagemigration;inhibitoryfactor;

matrixmetalloproteinaseG9;prognosis;children

系统性红斑狼疮(SLE)的常见病因有遗传因

素、免疫因素、环境因素等,病死率较高[1].一项流

行病学调查[2]显示,9%的SLE在儿童期发病,其临

床表现与成人相似.但是,有研究[3]指出,SLE 患

儿确诊1年内发生器官损伤风险高达32.0%,其中

以神经系统、皮肤及肾脏损伤为主,且损伤程度较成

人更严重.如何预测 SLE 患儿的器官损伤风险及

程度,改善其预后,是目前临床研究的重点.巨噬细

胞移动抑制因子(MIF)是机体重要的细胞因子,具

有趋化、抗氧化等作用,与炎症反应及免疫反应的关

系密切[4].基质金属蛋白酶G9(MMPG9)属于 MMP

家族成员,是降解Ⅳ型胶原最主要的胶原酶,能促进

白细胞渗出,调节炎性因子的分泌,参与机体的炎症

反应[5].鉴于此,本研究检测 SLE 患儿血清 MIF、

MMPG9水平并分析其对 SLE 患 儿 预 后 的 预 测 价

值,旨在为临床提供参考.

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年2月至2022年6月间运城市中心

医院收治的SLE首诊患儿126例,其中男16例,女

110例;年龄4~17岁,平均(10.82±2.56)岁.收集

所有患儿年龄、性别、免疫抑制剂(甲氨蝶呤、环磷酰

胺、环孢素 或 其 他)及 免 疫 球 蛋 白 使 用 情 况;使 用

SLE评分指数(SLEDAI)评估患儿疾病活动度[6],

SLEDAI≤4分为基本无活动,5~9分为轻度,10~

14分为中度.本研究经本院伦理委员会审核批准

(伦审2020006号).

纳入标准:1)符合 SLE 诊断标准[7];2)年龄<

18周岁;3)首次确诊为SLE,且未接受过相关治疗;

4)入组时SLEDAI<15分;5)患儿家属签署知情同

意书.排除标准:1)入组时已发生脏器受累;2)合并

儿童过敏性紫癜、川崎病等其他免疫性疾病;3)合并

恶性肿瘤或血液系统疾病;4)既往患有原发性或继

发性肾病、神经系统疾病等;5)近1个月内使用过糖

皮质激素、免疫抑制剂治疗;6)合并局部或全身感染

性疾病;7)患儿治疗依从性差.

1.2 方法

1.2.1 治疗方法

所有患儿完善相关检查后给予一般治疗,并口

服糖皮质激素泼尼松(0.5~1.0 mg?kg

-1 ?d-1),

免疫抑制剂包括甲氨蝶呤片(10~15mg?m-2,每

周1次)、环磷酰胺片(8~12mg?kg

-1?d-1,每2

周连用2d)、环孢素胶囊(3~6 mg?kg

-1 ?d-1)

等,连续治疗6个月至1年.

1.2.2 随访及分组

所有患儿首诊后经门诊完成为期1年的随访,

统计随访期间患儿的预后情况.按随访期间患儿有

无器官损伤将其分为预后不良组(n=39)、预后良

好组(n=87).器官损伤 发 生 情 况 包 括 神 经 损 伤

(主要表现为中枢神经系统弥漫性脑功能障碍、周围

神经损害等,综合症状、血清学、影像学检查等综合评

估确诊)、肾脏损伤(主要表现为尿量异常、血尿、水肿

等,实验室检查提示持续血肌酐升高、内生肌酐清除

率下降,经肾穿刺活检确诊等)、骨骼肌肉损伤(主要

表现为局部肿胀、疼痛、紧张、痉挛、皮下瘀青)等.

1.2.3 实验室指标检测

治疗前采集患儿空腹肘静脉血5mL,4000r?

min-1离心15 min收集血浆,使用 SHSG3000红细

胞沉降率测定仪(北京赛尔福知心科技有限公司)测

定红 细 胞 沉 降 率 (ESR). 另 取 肘 静 脉 血 5 mL,

3000r?min-1离心10min收集血清,采用胶体金

40 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第48页

法测定降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP),试剂盒

由北京乐普诊断科技股份有限公司提供;采用酶联

免疫测定法测定血清 MIF、MMPG9水平,试剂盒由

阿里生物技术泰州有限公司提供.

1.2.4 统计学方法

使用SPSS25.0软件进行数据处理.计量资料

以x±s表示,2组间比较采用独立样本t 检验;计

数资料以n(%)表示,采用χ2 检验;等级资料采用

秩和检 验;采 用 Pearson 相 关 分 析 SLE 患 儿 血 清

MIF与 MMPG9水平的关系;采用 Logistic回归分

析SLE患儿预后的影响因素;绘制受试者工作特征

曲线(ROC)及计算曲线下面积(AUC),分析血清

MIF、MMPG9水平对SLE患儿预后的预测价值;采

用 R4.1.0 软 件 绘 制 血 清 MIF、MMPG9 水 平 预 测

SLE患儿预后的决策曲线.以 P<0.05为差异有

统计学意义.

2 结果

2.1 患儿随访情况

126例SLE患儿随访1年预后良好87例,预后

不良39例,预后不良率为30.95%,其中包括神经损

伤10例、肾脏损伤19例、骨骼肌肉损伤6例、其他

损伤4例.

2.2 2组患儿基线资料比较

2组患儿年龄、性别、免疫抑制剂及免疫球蛋白

使用情况比较差异均无统计学意义(P>0.05);2组

疾病活动度比较差异有统计学意义(P<0.05).见

表1.

表1 2组患儿基线资料比较 n(%)

组别 n

年龄 性别 疾病活动度

<7岁 7~12岁 >12岁 男 女 基本无活动 轻度活动 中度活动

预后不良组 39 11(28.21) 15(38.46) 13(33.33) 7(17.95) 32(82.05) 5(12.82) 13(33.33) 21(53.85)

预后良好组 87 15(17.24) 40(45.98) 32(36.78) 9(10.34) 78(89.66) 29(33.33) 39(44.83) 19(21.84)

χ2/Z 2.885 0.802 3.570

P 0.236 0.370 <0.001

组别 n

免疫抑制剂使用

甲氨蝶呤 环磷酰胺 环孢素 其他

免疫球蛋白使用

预后不良组 39 13(33.33) 18(46.15) 6(15.38) 2(5.13) 13(33.33)

预后良好组 87 22(25.29) 34(39.08) 15(17.24) 16(18.39) 17(19.54)

χ2/Z 4.325 2.824

P 0.228 0.093

2.3 2组治疗前各实验室指标比较

预后不良组患儿治疗前 ESR、PCT、CRP 及血

清 MIF、MMPG9 水 平 均 高 于 预 后 良 好 组 (P <

0.05).见表2.

表2 2组治疗前各实验室指标比较 x±s

组别 n

ESR/

(mm?h-1)

PCT/

(ng?mL-1)

CRP/

(mg?L-1)

MIF/

(ng?mL-1)

MMPG9/

(ng?mL-1)

预后不良组 39 21.33±4.21 1.91±0.54 21.75±5.28 9.96±2.15 207.85±31.48

预后良好组 87 18.35±3.73 1.56±0.39 18.39±4.65 8.13±1.96 178.92±25.61

t 3.964 3.610 3.608 4.687 5.449

P <0.001 0.001 <0.001 <0.001 <0.001

2.4 血清 MIF与 MMPG9水平的相关性

Pearson相关性分析显示,SLE 患儿治疗前血

清 MIF水平与 MMPG9 水平呈正相关(r=0.466,

P<0.001).见图1.

2.5 SLE患儿预后不良的影响因素

将SLE 患儿预后作为因变量(1= 预后不良,

0=预后良好),将疾病活动度、治疗前 ESR、PCT、

CRP及血清 MIF、MMPG9水平作为自变量,经 LoG

gistic回归分析结果显示,疾病活动度、治疗前高水

平 ESR、PCT、CRP、MIF、MMPG9是SLE患儿预后

不良的独立危险因素(OR>1,P<0.05).见表3.

15.00

12.50

10.00

7.50

5.00

MIF/(n ·g mL-1

)

100.00 150.00 200.00 250.00 300.00

R2 线性(L)=0.217

y=2.45+0.03x

MMPG9/(ng?mL-1)

图1 Pearson相关性分析散点图

荆竹山等:系统性红斑狼疮患儿治疗前血清 MIF、MMPG9水平测定及其对预后的预测价值分析 41

第49页

表3 SLE患儿预后不良的影响因素分析

项目 β 标准误 Waldχ2 P OR 95%CI

疾病活动度 1.045 0.450 5.385 0.020 2.844 1.176~6.875

ESR 0.290 0.094 9.584 0.002 1.336 1.112~1.605

PCT 2.995 0.894 11.223 0.001 19.995 3.466~115.349

CRP 0.278 0.073 14.703 <0.001 1.321 1.146~1.522

MIF 0.534 0.206 6.710 0.010 1.705 1.139~2.554

MMPG9 0.032 0.014 5.217 0.022 1.033 1.005~1.062

常量 -30.639 5.737 28.521 <0.001

2.6 血清 MIF、MMPG9水平对SLE患儿预后的预测

价值

以SLE 患儿预后作为状态变量进行 ROC 分

析,结果显示,血清 MIF、MMPG9水平单独及联合

预测SLE 患儿预后的 AUC>0.70,具有一定的预

测价值,且联合预测价值最高.见表4和图2.

表4 血清 MIF、MMPG9水平对SLE患儿预后的预测价值

项目 AUC cutGoff 95%CI P 特异度 敏感度 约登指数

MIF 0.730 9.720 0.634~0.826 <0.001 0.828 0.564 0.392

MMPG9 0.753 190.620 0.661~0.846 <0.001 0.678 0.769 0.447

联合 0.779 0.681~0.877 <0.001 0.828 0.667 0.495

0.2 0.4 0.6 0.8 0.0 1.0

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2 MIF

MMP-9

联合检测

参考线

曲线来源

1G特异度

图2 血清 MIF、MMPG9水平预测SLE患儿预后的 ROC曲线

2.7 血清 MIF、MMPG9水平预测SLE患儿预后的

决策曲线

决策曲线显示,阈值在0.22~0.24、0.30~0.58、

0.62~1.00,血清 MIF、MMPG9联合预测 SLE 患儿

预后的净收益率优于单独净收益率;阈值在0.0~

1.0范围内血清 MIF、MMPG9联合预测SLE患儿预

后的净收益率>0,有临床意义.见图3.

0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

MIF

MMP-9

联合检测

斜率

水平线

0.30

0.25

0.20

0.15

0.10

0.05

0.00

0.0

高风险阈值

图3 血清 MIF、MMPG9水平预测SLE患儿预后的决策曲线

3 讨论

多器官损伤是儿童SLE的典型特征,不仅会影

响患儿生活质量,也会显著增加其病死率,影响患儿

预后[8].国外一项研究[9]显示,48.0%的 SLE 患儿

存在累积性器官损伤.LI等[10]研究显示 1020 例

SLE患儿中46.0%伴有狼疮性肾炎.本研究结果

显示,126 例 SLE 患 儿 1 年 内 器 官 损 伤 发 生 率 为

30.95%,表明 SLE 患儿易发生器官损伤,提示预后

较差.

ESR、PCT、CRP 是目前临床用于评估 SLE 患

儿病情及预后的主要指标.既往多项研究[11G12]证

实 ESR、PCT、CRP 与 SLE 疾病活动度、合并感染

有关.本研究显示 ESR、PCT、CRP是 SLE 患儿预

后不良的独立危险因素.但以上指标受多种因素影

响,对SLE患儿预后的预测价值有限.MIF是一种

多效炎性细胞因子,主要由单核巨噬细胞、T 淋巴细

胞产生,参与多种疾病的发生[13].MMPG9是上皮

细胞、单核细胞、淋巴细胞等多种细胞分泌的蛋白水

解酶,参与炎症反应、宿主防御等生理病理过程[14].

本研究结果显示,治疗前血清 MIF、MMPG9水平是

SLE患儿预后不良的独立危险因素.高水平 MIF

能刺激 B淋巴细胞分泌抗体,促进 T 细胞增殖,诱

导机体产生大量自身抗体与炎症细胞,加重SLE病

情,诱发并加重多器官损伤[15].MIF还具有趋化作

用,作为信号分子 MIF 能作用于其他细胞,通过与

其受体结合,激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶、G

蛋白偶联受体相关信号,启动相关转录因子,促进下

42 南昌大学学报(医学版)2023年12月,第63卷第6期

第50页

游炎性细胞因子释放,进而损伤 SLE 患儿神经、肾

脏等器官,影响患儿预后[16].MMPG9大量释放活

化后能导致细胞外基质降解,破坏血管内皮组织,加

重SLE患儿血管损害,引起多器官损伤[17].另外

肾脏组织中大量细胞外基质的异常聚集,也是导致

SLE肾脏损害的重要原因,而 MMPG9对细胞外基

质的水解作用,还会引起细胞外基质在肾脏中聚集,

导致肾小球及肾小管间质纤维化,最终导致狼疮性

肾炎的发生,影响患儿预后[18].ADAMIDIS等[19]

研究显示SLE患者血清 MMPG9水平显著增加,且

与SLEDAI评分 具 有 显 著 相 关 性,MMPG91562T

等位基因增加SLE的患病风险,这与本研究结果类

似.本 研 究 结 果 还 显 示,SLE 患 儿 血 清 MIF 与

MMPG9水平呈正相关,说明二者之间存在相关性.

MIF能促进白细胞介素G1(ILG1)、ILG6及肿瘤坏死

因子Gα 等 多 种 前 炎 症 因 子 释 放,还 能 通 过 激 活

MAPK/ERK 信 号 通 路,使 APG1 活 化,进 而 调 控

MMPG9的表达[20].因此 MIF/MMPG9信号通路可

能在SLE患儿疾病发生发展中起重要作用.本研

究经 ROC 曲线显示,血清 MIF、MMPG9水平单独

及联合预测SLE患儿预后具有一定的预测价值,但

ROC曲线仅关注模型的预测准确性,不能解决模型

的临床价值.决策曲线显示,血清 MIF、MMPG9联

合预测SLE患儿预后的净收益率优于单独净收益

率,本研究通过绘制决策曲线表明血清 MIF、MMPG

9联合预测的阈值概率范围、收益的大小更适用于

临床,提 示 临 床 可 通 过 早 期 检 测 SLE 患 儿 血 清

MIF、MMPG9水平,并可依据检测结果有针对性进

行 MIF、MMPG9抑制剂治疗,这可能为SLE提供新

的治疗选择.

综上,治疗前血清 MIF、MMPG9水平在预后不

良SLE 患 儿 更 高;治 疗 前 检 测 患 儿 血 清 MIF、

MMPG9可对其预后进行较好的风险预测,且联合

预测净收益率更高,提示其可用于预测SLE患儿的

预后.但本研究有一定的局限性,首先病例样本有

限,其次缺乏二者动态变化及动态变化与疾病的关

系的研究,后续应进一步探索 MIF、MMPG9在儿童

SLE中的作用,以明确其临床价值.

参考文献:

[1] 田新平,李梦涛,曾小峰.我国系统性红斑狼疮的诊治现状与未

来发展方向:来自中国系统性红斑狼疮发展报告2020年年度

报告[J].中华内科杂志,2022,61(6):611G616.

[2] VALENZUELA ALMADA M O,HOCAOGLU M,DABITJ

Y,etal.EpidemiologyofchildhoodGonsetsystemiclupuseryG

thematosus:apopulationGbasedstudy[J].ArthritisCareRes

(Hoboken),2022,74(5):728G732.

[3] 中华医学会儿科学分会免疫学组,中华儿科杂志编辑委员会.

中国儿童系统性红斑狼疮诊断与治疗指南[J].中华儿科杂志,

2021,59(12):1009G1024.

[4] ALLAM VSRR,PAVLIDISS,LIUG,etal.MacrophagemigraG

tioninhibitoryfactorpromotesglucocorticoidresistanceofneutroG

philicinflammationina murine modelofsevereasthma[J].

Thorax,2023,78(7):661G673.

[5] ATTIAZR,ZEDAN M M,MUTAWIT M,etal.Association

ofthegelatinaseB/metalloproteinase9(MMPG9)genehaploG

typeinsystemiclupuserythematosus(SLE)inthepediatric

Egyptianpopulation[J].Children(Basel),2022,9(9):1271.

[6] GLADMANDD,IBAÑEZD,UROWITZM B.Systemiclupus

erythematosusdiseaseactivityindex2000[J].JRheumatol,

2002,29(2):288G291.

[7] 中华医学会儿科学分会风湿病学组,中国医师协会风湿免疫科

医师分会儿科学组,海峡两岸医药卫生交流协会风湿免疫病学

专业委员会儿童学组,等.儿童系统性红斑狼疮临床诊断与治

疗专家共识:2022版[J].中华实用儿科临床杂志,2022,37(9):

641G652.

[8] 张爱华,朱春华.儿童狼疮性肾炎诊治现状及面临的困难[J].

中华儿科杂志,2021,59(9):717G719.

[9] KIFER N,SESTAN M,FRKOVIC M,etal.2019 ACR/EUG

LAR classification criteriaandtherapyin predicting organ

damageaccrualinpatientswithchildhoodGonsetsystemiclupus

erythematosus:aretrospectivestudyoverthelast29years[J].

Lupus,2022,31(7):828G836.

[10] LISP,XUEY,KUANG W Y,etal.Clinicalcharacteristicsof

1020 childhoodGonset systemiclupus erythematosus:data

fromahealthcentreinChina[J].ClinExpRheumatol,2023,

41(3):747G752.

[11] 庞杰,张宗芳,李艳霞,等.血清补体 C5a水平和红细胞沉降率

与系统性红斑狼疮疾病活动度及预后的关系[J].中华实用诊

断与治疗杂志,2020,34(11):1110G1113.

[12] BRUERAS,VENTURA MJ,AGARWALSK,etal.TheuG

tilityoferythrocytesedimentationrate,CGreactiveprotein,

andprocalcitoninindetectinginfectionsinpatientswithsysG

temiclupuserythematosus:asystematicreview[J].Lupus,

2022,31(10):1163G1174.

[13] PATELN M,YAMADAN,OLIVEIRAFR MB,etal.InhiG

bitionofmacrophagemigrationinhibitoryfactoractivityatG

tenuateshaemorrhagicshockGinducedmultipleorgandysfuncG

tioninrats[J].FrontImmunol,2022,13:886421.

[14] 张秋双,闫秀清,葛风梅,等.细胞外基质金属蛋白酶诱导因子

与系统性红斑狼疮患者动脉粥样硬化的相关性研究[J].中华

风湿病学杂志,2021,25(4):236G240.

[15] SAM NB,GUANSY,WANGP,etal.LevelsofthemacroG

phagemigrationinhibitoryfactorandpolymorphismsinsysG

temiclupuserythematosus:a metaGanalysis[J].Arch Med

Sci,2021,17(5):1232G1240.

(下转第49页)

荆竹山等:系统性红斑狼疮患儿治疗前血清 MIF、MMPG9水平测定及其对预后的预测价值分析 43

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