32 安全控制 280-287 j89 梁王茶水提物急性毒性评价 8

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32 安全控制 280-287 j89 梁王茶水提物急性毒性评价 8

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2022, Vol.38, No.6280 梁王茶水提物急性毒性评价 赵春燕,龚加顺,王秋萍*(云南农业大学食品科学技术学院,云南昆明 650201) 摘要:以掌叶梁王茶叶为原料,研究其水提物的急性毒性及半数致死量LD50。结果表明:梁王茶水提物经口LD50>15000 mg/kg·bw,属于实际无毒物质。与对照组相比,灌胃 2521~15000 mg/kg·bw 梁王茶水提物对雌性和雄性小鼠的体重增量无显著影响(p>0.05),对雌鼠心、脾和肺脏器系数、血清 ALT、AST 和肌酐水平均无显著影响(p>0.05),对雄鼠肺和肾脏器系数、血清 ALT 水平均无显著影响(p>0.05)。极高剂量梁王茶水提物使雌性(剂量≥7350 mg/kg·bw)和雄性(剂量≥5145 mg/kg·bw)小鼠的血清尿素水平显著高于空白对照组(p<0.05),说明极高剂量梁王茶水提物对肾脏有一定毒性。急性毒性研究表明,梁王茶水提物经口 LD50>15000 mg/kg·bw,属于实际无毒... [收起]
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32 安全控制 280-287 j89 梁王茶水提物急性毒性评价 8
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现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2022, Vol.38, No.6

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梁王茶水提物急性毒性评价

赵春燕,龚加顺,王秋萍*

(云南农业大学食品科学技术学院,云南昆明 650201)

摘要:以掌叶梁王茶叶为原料,研究其水提物的急性毒性及半数致死量LD50。结果表明:梁王茶水提物经口LD50>15000 mg/kg·bw,

属于实际无毒物质。与对照组相比,灌胃 2521~15000 mg/kg·bw 梁王茶水提物对雌性和雄性小鼠的体重增量无显著影响(p>0.05),

对雌鼠心、脾和肺脏器系数、血清 ALT、AST 和肌酐水平均无显著影响(p>0.05),对雄鼠肺和肾脏器系数、血清 ALT 水平均无显著

影响(p>0.05)。极高剂量梁王茶水提物使雌性(剂量≥7350 mg/kg·bw)和雄性(剂量≥5145 mg/kg·bw)小鼠的血清尿素水平显著高

于空白对照组(p<0.05),说明极高剂量梁王茶水提物对肾脏有一定毒性。急性毒性研究表明,梁王茶水提物经口 LD50>15000 mg/kg·bw,

属于实际无毒物质,极高剂量时其对肾脏有一定毒性。

关键字:梁王茶;水提物;急性毒性;安全评价

文章篇号:1673-9078(2022)06-280-287 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2022.6.0970

Assessment of Acute Toxicity of Nothopanax delavayi (Franch.) Harms ex

Diels Water Extract

ZHAO Chunyan, GONG Jiashun, WANG Qiuping*

(College of Food Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China)

Abstract: Leaves of Nothopanaxdelavayi (Franch.) Harms ex Diels (LWC), was used as raw material, the acute toxicity and half lethal

dose (LD50) of its water extract was investigated. Results showed that the oral LD50 of LWC water extract was higher than 15000 mg/kg.bw,

which is actually non-toxic substance. Comparing to control group, gavage of 2521~15000 mg/kg·bw LWC water extract had no significant

effect on the weight gain of both female and male mice (p>0.05), showing insignificant influence on organ coefficients of heart, spleen and lung,

serum ALT, AST and creatinine level of female mice (p>0.05), neither were lung and kidney organ coefficients, serum ALT of male mice

(p>0.05). The serum urea level of female (dose ≥7350 mg/kg·bw) and male (dose ≥5145 mg/kg·bw) mice was significantly higher than that of

the blank control group (p<0.05), indicating that the very high dose of LWC tea water extract had a certain toxicity to the kidney. In summary,

acute toxicity studies have shown that the oral LD50 of LWC water extract is more than 15000 mg/kg·bw, which is a practically non-toxic

substance, however it is toxic to the kidneys at extremely high doses.

Key words: Nothopanax delavayi (Franch.) Harms ex Diels; water extract; acute toxicity; safety evaluation

引文格式:

赵春燕,龚加顺,王秋萍.梁王茶水提物急性毒性评价[J].现代食品科技,2022,38(6):280-287

ZHAO Chunyan, GONG Jiashun, WANG Qiuping. Assessment of acute toxicity of Nothopanax delavayi (Franch.) Harms ex diels water

extract [J]. Modern Food Science and Technology, 2022, 38(6): 280-287

梁王茶属(Nothopanax Miq.)又名山槟榔、树五

加等,系五加科(Araliaceae)无毛刺灌木或乔木,无

皮刺,其叶形单叶或掌状复叶,叶柄细长,无托叶[1,2]。

收稿日期:2021-08-29

基金项目:云南省基础研究面上项目(2019FB051);云南省农业基础研究联

合专项资助项目(2017FG001-089);校企合作项目(KX141536)

作者简介:赵春燕(1994-),女,博士研究生,研究方向:营养与食品安

全,E-mail:2052896274@qq.com

通讯作者:王秋萍(1987-),女,博士,讲师,研究方向:茶叶化学、功

效及其活性成分生物制造,E-mail:soffywang@163.com

我国主要有 2 种即异叶梁王茶[Nothopanax davidii

(Franch.) Harms ex Diels]和掌叶梁王茶[N.delavayi

(Franch.) Harms ex Diels][3,4]。

梁王茶具有较高的药用价值[5],常被人们当作时

蔬食用,如在阳宗境内有着“茶不泡水当道菜”

[1]。梁

王茶嫩茎叶不仅可作为蔬菜食用[6],还可制成梁王茶

干叶泡水喝[7],其树皮被用来提取栲胶,树叶常被用

来驱杀害虫[7]。梁王茶作为药用材料时,有清热、祛

风除湿药活络、治疗喉咙肿痛等作用[8,9]。另据报道,

梁王茶多糖也有较好的双向免疫调节、抗氧化应激和

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抗炎症的生理活性作用[10]。

梁王茶的化学成分组成和提取是目前研究较多的

一个方面。杨青等[3]使用色谱法首次从掌叶梁王茶茎

皮中分离出了三对节酸和原儿茶酸等化合物,这些化

合物被报道具有较好的生理活性作用。庾石山等[11-15]

从异叶梁王茶甲醇提取物中分离出八种五环三贴皂苷

单体,从树皮醇提物中分离得到异叶梁王茶苷Ⅶ和

Ⅷ、梁王茶苷Ⅱ及五种新的Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ和Ⅺ梁王

茶苷化合物。缪明志等[10]研究了不同部位掌叶梁王茶

多糖的含量分布,发现可溶性多糖含量分布在根部最

高,可达 1.68%。洪化鹏等[16]在研究异叶梁王茶鲜叶

蒸馏精油的过程中,发现其精油主要包含月桂烯等化

合物。赵春燕等[17]检测了掌叶梁王茶叶中黄酮、多酚

等组分的含量,并对其抗氧化能力进行了检测,发现

茶粉的抗氧化能力强于水提物。

上述研究表明梁王茶含有较多种类的萜类化合物

及其他活性成分,有着较高药用价值,但是对于梁王

茶的毒理学研究尚无报道,为进一步开发及挖掘梁王

茶的价值,有必要对其毒理学进行研究。因此,本研

究对梁王茶的急性毒性采用 LD50评价方法进行初探,

以对梁王茶产业的发展提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

掌叶梁王茶由兰坪润民农产品有限责任公司提

供,将掌叶梁王茶叶制成干叶备用。

ALT、AST、URE、CREA 试剂盒,迈克生物股

份有限公司。3100 全自动生化分析仪,日本株式会社

日立制作所。

1.2 方法

1.2.1 梁王茶水提物的制备

梁王茶与水的比例为 1 g:10 mL,沸水浸提 30

min,过滤得到滤液。按上述条件重复浸提一次,合

并两次滤液,在 60 ℃减压浓缩,浓缩液真空冷冻干

燥得到梁王茶水提物备用。真空冷冻干燥得到的梁王

茶水提物主要由水溶性总糖 236.05 g/kg、水溶性蛋白

质 99.47 g/kg、水溶性氨基酸 30.83 g/kg、总多酚 27.08

g/kg、水溶性多糖 17.99 g/kg、总黄酮 2.03 g/kg 等化

学组分组成[17]。

1.2.2 实验动物

SPF 级昆明种小鼠,雌雄各半,体重 20±2 g,购

于昆明医科大学(SCXK(滇)2015-0002)。基础饲料喂

养,自由饮水和摄食,12 h 昼夜交替、环境温度

20±2 ℃,相对湿度 40%~70%。

1.2.3 正式实验

参照《食品国家安全标准急性经口毒性试验》[18]

霍恩氏法进行预实验。根据预实验结果,小鼠未出现

死亡,存活率达 100%,无法得出 0%和 100%的估计致

死量(Dn,Dm)。因此采用限量法进行经口急性毒性

实验。84 只小鼠(雌雄各半)设置为 6 个剂量组(15000、

10500、7350、5145、3601.5、2521 mg/kg·bw,n=12)

和一个空白对照组(Control,n=12),组间剂量比为

1:0.7,灌胃体积为 30 mL/kg。给药时空白对照组给予

同体积的蒸馏水。给药前小鼠自由饮水,禁食 4~6 h,

给药 3 h 后恢复投食,于给药后 1、2、4、6 h 密切观

察小鼠体征,此后每天 1 次,连续观察 14 h 并记录小

鼠活动状况、体征、中毒及死亡情况。于 14 h 观察期

后牺牲老鼠,解剖并观察各器官的情况,并对心、肝、

脾、肺、肾脏进行称重,计算脏器系数。采用全自动生

化分析仪进行谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、

肌酐(URE)、尿素(CREA)生化指标的测定。

1.3 统计分析

数据以平均值±标准差表示,使用 Grubbs 检验数

据排除过失误差;采用 SPSS 19.0 软件对合格数据进

行显著性分析,采用 GraphPad Prsim 8.0 作图。

表 1 不同剂量梁王茶水提物对雌雄小鼠死亡率的影响

Table 1 Effect of LWC water extract on the death rate of female and male mice

组别 雌雄总数量/只 给药剂量/(mg/kg·bw) 雄鼠死亡数/只 雄鼠死亡/% 雌鼠死亡数/只 雌鼠死亡/%

Control 12 0 - 0 - 0

1 12 2521 - 0 - 0

2 12 3601.5 - 0 - 0

3 12 5145 - 0 - 0

4 12 7350 - 0 - 0

5 12 10500 - 0 - 0

6 12 15000 - 0 - 0

注:“-”表示小鼠死亡数为 0。

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2 结果与讨论

2.1 梁王茶水提物对雌雄小鼠死亡率的影响

表 2 梁王茶水提物对雌雄小鼠中毒表现的影响

Table 2 Effect of LWC water extract on poisoning

manifestations of female and male mice

观察项目 表现及症状

动物行为 体位、叫声正常,无呆滞、自残行为

各种刺激反应 夜间较兴奋

肌肉张力 无抽搐、麻痹、共济失调现象

瞳孔大小 眼球无突出或震颤,眼睑正常

呼吸情况 实验组与空白组呼吸情况无明显差异

腹形 无胀气或收缩现象

分泌物 无异常分泌物

皮肤和被毛 皮肤颜色正常,无松弛现象,毛色顺滑较完整

体温 无发热现象

舌苔颜色 淡红色

不同剂量梁王茶水提物对雌性和雄性小鼠死亡率

的影响如表 1 所示,其中每组 12 只小鼠,雌雄各六只。

给予雌雄小鼠分别灌胃 2521、3601.5、5415、7350、

10500、15000 mg/kg·bw 梁王茶水提物,小鼠死亡率

均为 0%,说明梁王茶水提物不会引起小鼠死亡。

2.2 梁王茶水提物对雌雄小鼠中毒表现的影响

给予小鼠不同剂量梁王茶水提物后,在 14 d 观察

时间内,雌雄小鼠均未出现异常行为,分泌物、体温、

呼吸情况、皮肤毛被等正常,未见任何中毒症状(见

表 2)。由此可见梁王茶水提物不会引起受试动物的中

毒反应,其 LD50 值大于 15000 mg/kg·bw,根据

WHO1977 年颁布的毒性分级标准[19],梁王茶水提物

属实际无毒级物质。

2.3 梁王茶水提物对小鼠体重的影响

灌胃不同剂量梁王茶水提物对雌雄小鼠体重的影

响见表 3。由表可知,给予雌雄小鼠不同剂量

(2521~15000 mg/kg·bw)的梁王茶水提物,其体重与

对照组无显著性差异(p>0.05),说明梁王茶水提物对

雌雄小鼠体重无影响。

表 3 不同剂量梁王茶水提物对雌雄小鼠体重的影响

Table 3 Effects of LWC water extract on the body weight of female and male mice

组别 梁王茶水提物

/(mg/kg·bw)

雄性小鼠体重/g 雌性小鼠体重/g

给药前 7 d 14 d 增量 给药前 7 d 14 d 增量

Control 0 21.83±1.74 29.25±1.85 30.57±2.23 8.74±2.37 25.20±0.78 35.06±1.23 37.31±2.10 12.11±2.08

1 2521 23.73±2.10 29.77±1.34 31.72±1.58 7.99±2.96 26.44±1.53 35.29±1.40 39.14±3.03 12.70±4.00

2 3601.5 21.35±0.66 28.42±2.10 29.97±1.89 8.62±1.33 24.27±2.03 34.11±1.11 38.09±1.93 13.82±3.45

3 5145 22.00±1.00 29.82±1.87 30.28±1.48 8.28±1.01 22.09±1.26 35.03±1.69 39.01±2.90 16.92±2.94

4 7350 21.83±1.46 30.07±4.07 31.40±4.06 9.57±2.92 24.98±0.84 34.68±2.16 36.75±4.05 11.77±3.31

5 10500 22.55±1.44 29.45±2.11 30.70±1.93 8.15±2.14 25.77±1.92 35.05±3.24 37.50±3.73 11.73±3.21

6 15000 21.84±2.07 29.69±3.95 29.96±4.08 8.12±3.22 24.43±2.44 33.20±3.08 35.90±2.95 11.47±1.20

注:同列间各梁王茶水提物组与 Control 组比较均无显著差异(p>0.05)。

2.4 梁王茶水提物对小鼠主要脏器系数的影

梁王茶水提物对雌雄小鼠主要脏器系数的影响见

图 1。如图 1 所示,给予雌性小鼠不同剂量梁王茶水

提物后,各剂量组心脏系数与对照组相比无显著性差

异(p>0.05),说明梁王茶水提物对雌性小鼠心脏无影

响。肝脏则是身体内代谢主器官,在机体中有去氧化、

储存肝糖原、分泌性蛋白质的合成以及解毒等作用

[20,21]。肝脏也可转化来自体内和体外的许多非营养性

物质如各种药物以及体内某些代谢产物,并通过新陈

代谢的方式彻底分解或以原形将这些物质排出体外

[22,23]。与对照组相比,灌胃 2521~10500 mg/kg·bw 梁

王茶水提物对雌性小鼠肝脏系数均无显著影响

(p>0.05),最高剂量组(15000 mg/kg·bw)肝脏系数

显著低于对照组(p<0.05)。给予 2521~15000 mg/kg·bw

梁王茶水提物对雌性小鼠脾脏系数均无显著影响

(p>0.05),最高剂量组(15000 mg/kg·bw)雌鼠的脾

脏系数降低,但无显著性差异(p>0.05),有研究表明

鼠脾脏系数降低可能是由于免疫抑制作用引起的[24]。

灌胃 2521~15000 mg/kg·bw 梁王茶水提物后,雌鼠的

肺脏系数增加,但与对照组相比均无显著差异

(p>0.05),表明梁王茶水提物对雌性小鼠肺脏无影

响。肾脏主要有排泄体内代谢产物和过滤除去体内的

有害物质的作用,肾脏功能的紊乱会放大有毒物质对

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机体的毒害程度[25]。给予雌性小鼠 2521、3601.5 mg/kg

梁王茶水提物,其肾脏系数与正常小鼠相比无显著性

差异(p>0.05),但灌胃更高剂量(5415、7350、10500、

15000 mg/kg)时,雌性小鼠的肾脏系数显著高于对照

组(p<0.05),表明梁王茶水提物对雌性小鼠的肾脏产

生损伤。

脏器系数一方面可以反映动物内脏器官的功能状

态,也可应用于毒性试验和安全评价中,为相应的模

型比较提供参考[26,27]。

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图 1 不同剂量梁王茶水提物对雌雄小鼠主要脏器系数的影响

Fig.1 Effects of LWC water extract on main organ coefficients

of female and male mice

注:*表示梁王茶水提物组与 control 组相比有显著性差异

(p<0.05)。

如图 1 所示,给予雄性小鼠不同剂量梁王茶水提

物后,2521 mg/kg·bw 的心脏系数与对照组相比无显

著差异( p>0.05 ),其他剂量组( 3601.5~15000

mg/kg·bw)心脏系数显著低于对照组(p<0.05),表明

梁王茶水提物对雄性小鼠心脏呈现一定毒性作用。灌

胃 2521~5145 mg/kg·bw 梁王茶水提物对雄性小鼠的

肝脏系数无显著影响(p>0.05),其中剂量为 7350

mg/kg·bw 时,呈现显著性差异(p<0.05),剂量为 10500

mg/kg·bw 时,梁王茶水提物对雄性小鼠的肝脏系数无

显著影响(p>0.05),这可能是小鼠个体差异造成的误

差。剂量为 15000 mg/kg·bw 时,雄鼠肝脏系数显著高

于对照组(p<0.05)。给予 2521~15000 mg/kg·bw 王茶

水提物,各剂量组雄鼠脾脏系数均显著高于对照组

(p<0.05),说明梁王茶水提物对雄鼠脾脏呈现一定毒

性作用。灌胃 2521~15000 mg/kg·bw 梁王茶水提物,

各剂量组雄鼠的肺和肾脏系数与对照组相比均无显著

差异(p>0.05),说明梁王茶水提物对雄性小鼠的肺和

肾脏没有毒性作用。

2.5 梁王茶水提物对小鼠血液生化指标的影

ALT 是临床上用于诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎

的重要指标,大量存在于肝细胞的细胞质中时会诱导

以上疾病发生,而 AST 则主要存在于肝脏和心脏两个

机体主要的器官内[28,29]。正常时血清中 AST 的含量较

低,但是肝脏和肾脏内相应细胞受损时,其含量在血

清中的浓度升高[30]。肌酐在衡量肾功能好坏时具有重

要的意义,是肌肉在机体内代谢的产物[31]。

如图 2 所示,给予不同剂量梁王茶水提物对雌雄

小鼠血液生化指标的影响如图 2 所示。灌胃 2521~

10500 mg/kg·bw 梁王茶水提物对雌鼠血清中的 ALT

(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、CREA(肌酐)

水平均无显著影响(p>0.05)。给予 2521~5145

mg/kg·bw 梁王茶水提物,雌鼠血清 UREA(尿素)含

量与对照组无显著差异(p>0.05);灌胃剂量为 7350

mg/kg·bw 与 10500 mg/kg·bw 时,雌鼠血清尿素含量

显著高于对照组(p<0.05),这与肾脏系数结果一致,

说明灌胃极高剂量梁王茶水提物对雌鼠肾脏表现出轻

微毒性,可能是超出了雌鼠肾脏的负担能力。

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图 2 不同剂量梁王茶水提物对雌鼠血液生化指标的影响

Fig.2 Effects of LWC water extract on blood biochemical

indexes of female and male mice

注:*表示梁王茶水提物组与 control 组相比有显著性差异

(p<0.05);ALT,谷丙转氨酶;AST,谷草转氨酶;UREA,

尿素;CREA,肌酐。

给予雄鼠不同剂量梁王茶水提物,其血清 ALT 水

平与对照组无显著差异(p>0.05)。与对照组相比,梁

王茶水提物组雄鼠血清 AST 水平呈降低趋势,且剂量

为 5145 mg/kg·bw 和 15000 mg/kg·bw 时,AST 水平显

著低于对照组(p<0.05),这与雄鼠心脏、肝脏系数结

果一致,与对照组比较发生了显著性变化(p<0.05)。

雄鼠血清尿素水平与梁王茶水提物剂量呈正相关趋

势,且剂量为 5145、7350、10500 mg/kg·bw 时,雄鼠

血清 UREA 水平显著高于对照组(p<0.05)。雄鼠血

清 CREA 水平随剂量增加而降低,且剂量为 5145、

10500、15000 mg/kg·bw 时,雄鼠血清 CREA 水平显

著低于对照组(p<0.05)。

本研究发现,灌胃高剂量梁王茶水提物(≥5145

mg/kg·bw)会引起雄鼠血清 AST 和肌酐显著降低

(p<0.05),然而这两项指标的降低在临床上无明显意

义。尿素可由肾小球滤过而排出体外,也是临床上用

于评估肾功能的重要指标之一,从图 2 可看出,给予

雌鼠高剂量(≥7350 mg/kg·bw)和雄鼠高剂量(≥5145

mg/kg·bw)梁王茶水提物,血清尿素水平显著上升

(p<0.05),表明极高剂量梁王茶水提物对雌雄小鼠肾

脏均有一定毒性。

3 结论

急性毒性研究表明,梁王茶水提物属于实际无毒

物质,其 LD50>15000 mg/kg·bw。梁王茶水提物对雌

鼠和雄鼠体重增量无显著影响(p>0.05)。与对照组相

比,给予雌鼠 2521~15000 mg/kg·bw 梁王茶水提物,

对其心脏、脾脏和肺脏系数、血清 ALT、AST 和肌酐

水平均无显著影响(p>0.05);灌胃高剂量梁王茶水提

物,雌鼠的肝脏系数(剂量≥15000 mg/kg·bw)显著降

低(p<0.05),肾脏系数(剂量≥5145 mg/kg·bw)和尿

素水平(剂量≥7350 mg/kg·bw)显著升高(p<0.05)。

与对照组相比,给予雄鼠 2521~15000 mg/kg·bw 梁王

茶水提物,对其肺脏和肾脏系数、血清 ALT 水平均无

显著影响(p>0.05);灌胃高剂量梁王茶水提物,雄鼠

的心脏系数(剂量≥3601.5 mg/kg·bw)、血清 AST(剂

量≥5145 mg/kg·bw)和肌酐(剂量≥5145 mg/kg·bw)

水平显著降低(p<0.05),和脾脏系数(剂量≥2521

mg/kg·bw)及尿素水平(剂量≥5145 mg/kg)显著升高

(p<0.05)。极高剂量梁王茶水提物对雌性(剂量≥5145

mg/kg·bw)小鼠肾脏有一定毒性。极高剂量梁王茶水

提物对雄性(剂量:7350 mg/kg·bw、15000 mg/kg·bw)

对小鼠肝脏有一定毒性。

参考文献

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17:89-91

LI Xiang, SONG Ting, ZHANG Ying, et al. Research

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